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进行细胞计数时要进行哪些步骤

发布时间:2022-09-20      点击次数:76
  常用的计数方法主要有手工计数(如利用改良牛鲍计数板)和细胞计数仪计数(经费充裕组常备)。从原理来说,这两种方法基本类似,大致是通过台盼兰或者荧光染料染色后,用肉眼或者用摄像机拍照后进行计数,差别就是前者人累,且精准度和稳定性较差;后者不累人,且精准度和稳定性较好。
  单细胞测序实验的第一步是单细胞悬液的制备,而悬液制备中细胞计数的准确性直接影响单细胞测序的数据质量。
  1.  计数板
  用96%酒精冲洗计数板后,用干净鹿皮擦净,另擦净盖片一张;把盖片覆在计数板上面,使之微微移向一侧,露出计数板台面少许,以便滴加细胞悬液;
  2.  染色
  取吸管1 支,伸入培养瓶中,轻轻反复吹打细胞悬液使细胞重悬均匀后,立即吸细胞悬液少许,向另一离心管中滴入细胞悬液9 滴,再滴入台盼蓝染液1 滴,混匀,置2~3 分种;
  3.  加悬液
  把计数板平放在显微镜台上,立即从计数板边缘轻轻滴1~2 滴已染色的细胞悬液,使之充满计数板和盖片间空隙中;
  4.  镜检
  镜下观察可见细胞分散各处,健康细胞胞体完整,透明不着色,凡着色细胞均为不健康者。计算四角大方格内的细胞数;压中线者只计算左线和上线者,右线和下线不计算在内(即仅计算压两个边的细胞)。
  5.  接种培养
  通过计数测知悬液中细胞数后,可根据实验所需细胞数量向培养容器中接种。细胞接种数量随实验目的、血清含量和细胞生物性状而定;一般接种量在1~10x105细胞/毫升范围,实验周期短,希望细胞增殖较快时,接种量可大些。用含血清量大的培养液培养胚胎来源细胞、无限细胞系和恶性细胞系时,细胞接种数量不宜太大。
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