您好!欢迎访问上海牧荣生物科技有限公司网站!
咨询热线

17621170138

当前位置:首页 > 技术文章 > 对细胞进行铺板要进行哪些操作

对细胞进行铺板要进行哪些操作

更新时间:2023-03-07      点击次数:862
  细胞铺板是细胞实验中最常见又必须掌握的一门技术,看似简单,然而却经常遇到如细胞居中或者中间稀疏等不均匀分布的现象,结果就是只能整板扔掉,重新铺板,既耽搁时间又浪费了细胞及培养板等资源。所以在进行细胞铺板的时候应该注意哪些事情。
  细胞居中和细胞边缘化
  从经济和高效的角度来说,需要根据实验目的选择不同规格的培养板。如在进行药物对待测细胞半抑制率(IC50)测试时,通常使用96孔板,一方面可以设置浓度梯度;另外还可一次性测多个药物,减少实验误差。
  收集细胞要混匀
  消化后的细胞一定要充分混匀,要把聚在一起的细胞团充分地吹打开,最好是单个的状态,但同时又不能损伤细胞,可以用玻璃吸管的移液器操作。离心也很有讲究,一般用1000 rpm/min即可。离心力太大细胞容易抱团!然后悬浮离心后的细胞团时,先不要把所有液体都加进去!一般先加2mL液体,然后用1mL移液器轻轻将细胞吹起,细胞要像云雾一样散开,这样易于形成单细胞。象下图所示的这种移液器就非常好用。
  接种细胞须小心
  铺6孔板,12孔板或24孔板,先在每个孔里面加1mL的培养基,晃动使之铺匀整个孔底,然后加入1 mL的细胞悬液。从孔的左边靠近底部慢慢加入,这样细胞悬液会平铺在整个孔底,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。
  轻轻敲打勿抱团
  细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。如果有抱团的话,用手指从底部轻轻敲打,使之分散。也可以用平板振荡器稍稍振荡一下,效果不错。参数要设置成振幅小而频率高。
  十字交叉要水平
  观察和敲打后放入培养箱,然后画“十字”,就是把细胞培养板贴着培养箱搁板,前后方向来回晃动10次,再左右方向晃动10次,正好是一个“十” 字形。然后就让它静静地呆在培养箱搁板上,没事不要去动它。这里要注意的是,托架应该装在四根立柱相同高度的孔上,培养箱的搁板要水平校正,尽量地做到水平。搁板会向一个方向倾斜,对于贴壁时间长的细胞,就算当时混匀了,放进培养箱后也摇匀了,但是重力作用下细胞也会向一侧聚集。 培养箱里面或者外面尽量不要放可以产生振动的仪器,比如蠕动泵、离心机、涡旋器一类的仪器。这些仪器产生的振动对细胞贴壁有影响,也可能会导致细胞贴壁不均匀。
 
扫一扫,关注微信
地址:上海市嘉定区安亭镇新源路155弄16号新源商务楼718室 传真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2024 上海牧荣生物科技有限公司 版权所有 All Rights Reserved.  备案号:沪ICP备2022017655号-1