流式细胞抗体的储存条件和稳定性维护直接影响其结合活性与实验结果的准确性,需从储存环境控制、分装与解冻操作、日常使用防护等维度规范管理,以下是步骤化、可落地的维护指南:
基础储存条件把控
长期储存:未开封的流式细胞抗体,优先置于 **-20℃或 - 80℃低温冰箱 ** 冻存,其中荧光标记抗体建议存放于 - 80℃以减少荧光素降解;避免将抗体存放于冰箱门处(温度波动大),应放置在冰箱内部稳定区域。
短期储存:开封后且短期内(1-2 周)会使用的抗体,可在 2-8℃冷藏保存,无需反复冻融;注意避光保存,所有荧光标记抗体都需全程避光,防止荧光淬灭。
特殊抗体储存:偶联酶的流式抗体(如 HRP 偶联抗体)需严格避免反复冻融,且冷藏时需密封防污染;生物素化抗体需与叠氮钠分开储存,防止叠氮钠影响生物素活性。
科学分装与解冻操作
分装原则:收到抗体后,立即在无菌条件下将母液分装为小体积(如 10μL、20μL)的工作液,每管为单次实验用量,避免因反复冻融导致抗体蛋白变性、活性下降。
解冻要求:冻存的抗体需在室温或 2-8℃条件下缓慢解冻,严禁直接温水浴或高温加速解冻;解冻后轻轻颠倒混匀,禁止剧烈涡旋,防止抗体聚集体形成。
日常使用与稳定性监测
使用前平衡:冷藏或解冻后的抗体,需在室温下平衡 15-30 分钟后再进行实验,避免温度差异影响抗体与抗原的结合效率。
污染防控:取用抗体时使用无菌吸头,避免交叉污染;开封后的抗体需及时密封,若发现抗体溶液出现浑浊、沉淀、颜色变深,说明已失活,需立即丢弃。
活性验证:建议每 3-6 个月对储存的抗体进行一次活性验证,通过已知阳性细胞样本的染色实验,对比荧光强度和阳性率,判断抗体是否保持有效结合能力;若荧光信号显著减弱,需更换新抗体。
额外稳定性维护注意事项
避免抗体接触强氧化剂、去污剂等化学物质,储存容器需选择无酶、低吸附的离心管,减少抗体蛋白的非特异性吸附。
长途运输时,需用干冰或冰袋维持低温环境,确保运输过程中温度波动在允许范围内,到货后立即检查抗体状态并及时入库存放。