DeNovix 自动细胞计数仪凭借精准、快速的检测优势，被广泛应用于细胞浓度、活力分析等实验场景，样本制备的规范性直接决定检测结果的准确性。以下为该仪器的样本制备核心要求：
一、 样本前处理基础要求
细胞悬液状态控制
待测细胞需处于充分分散的单细胞悬液状态，避免细胞团块、聚集体的存在。若为贴壁细胞，需使用胰酶等消化试剂充分消化，消化后加入完全培养基终止反应，反复吹打 10-15 次，确保细胞分散均匀；若为悬浮细胞，可直接轻柔吹打混匀。
杂质与碎片清除
细胞悬液中若存在培养基残渣、细胞碎片、死细胞过多等情况，会干扰计数结果。可通过低速离心(1000-1500 rpm，5 min)洗涤细胞 2-3 次，弃去上清液，再用 PBS 或培养基重悬细胞；对于碎片较多的样本，可通过 200 目筛网过滤后再进行后续操作。
二、 样本浓度与稀释要求
浓度适配范围
DeNovix 自动细胞计数仪的最佳检测浓度为 1×10⁴ - 1×10⁷ 个 /mL，超出该范围会导致计数偏差。
若细胞浓度过高，需使用 PBS、生理盐水或无血清培养基进行梯度稀释，稀释时保证稀释液与细胞悬液充分混匀，避免局部浓度不均。
若细胞浓度过低，可通过离心浓缩(1500 rpm，5 min)后，弃去部分上清液重悬，提高细胞浓度。
稀释液选择原则
稀释液需与细胞相容性良好，避免使用高渗透压、强酸碱溶液，防止细胞裂解或形态改变。常规细胞可选用 PBS 或培养基；对于特殊敏感细胞，需使用专用细胞保存液。
三、 染色处理要求(针对活力计数)
染色剂选择与配比
进行细胞活力检测时，常用台盼蓝染色法，染色剂与细胞悬液需按照 1:1 体积比混合，例如取 10 μL 细胞悬液 + 10 μL 0.4% 台盼蓝染液，轻柔吹打混匀。
染色剂需现配现用，或严格按照说明书要求储存，避免染液变质影响染色效果。
染色时间控制
混合后需在 3-5 min 内完成上样检测，染色时间过长会导致活细胞被台盼蓝渗透，造成活力计数结果偏低。
四、 上样前样本处理要求
样本混匀操作
上样前需再次轻柔吹打细胞悬液(或染色后的混合液)3-5 次，确保细胞均匀分布，取悬液中层液体作为待测样本，避免吸取底部沉淀或上层泡沫。
避免气泡产生
样本制备全程需避免剧烈震荡，防止产生气泡。若悬液中存在气泡，可静置 1-2 min 待气泡消散，或用移液器轻轻吸走气泡，否则气泡会遮挡计数视野，造成结果误差。
五、 样本制备的注意事项
所有接触样本的耗材(移液器吸头、离心管等)需为无菌无酶材质，防止污染细胞。
样本制备需在无菌环境下操作，减少外界微生物污染，同时避免环境中的灰尘、杂质落入悬液。
不同类型细胞的制备方法可根据细胞特性适当调整，例如干细胞、原代细胞需减少吹打次数，避免细胞损伤。
扫一扫，关注微信
当前位置：