什么是核酸浓度因子，它们是如何确定的？

核酸定量依赖于测量DNA和RNA的紫外吸收率，常见于260纳米，核碱基在该处吸收力强。通过结合比尔-朗伯定律与消光系数，吸收值可以直接与核酸浓度相关。230 nm和260 nm的吸收为评估样品纯度提供了便捷的基础，支持基因组DNA、PCR产物及其他制备核酸样品的质量控制。与荧光染料测定结合使用，吸收度测量为定义DNA或RNA浓度提供了实用框架，以便后续应用。

比尔定律是描述物质浓度与其在已知光程距离下光吸收之间的关系的方程。

其中：

• Abs = 吸收度

• l = 光路长度：光线穿过物质的距离

• ε = 摩尔消光系数：衡量物质在特定波长下吸收光线的强度

• C = 物质浓度

我们可以用核酸浓度因子替代消光系数，因为这是另一种可用来关联物质吸收光线能力与浓度的数值。随后可用于核酸定量。

什么是核酸浓度因子，它们是如何确定的？

核酸浓度因子是波长特异性的转换因子，将吸收率与不同核酸类型的浓度联系起来，从而能够通过紫外吸收率测量直接计算DNA或RNA浓度。

这些核酸浓度因子是通过测量特定核酸在特定路径长度下吸收为1所需的浓度来确定的。已确定，在1厘米路径长度下，吸收率为1（1 Abs）需要0.02 ng/μL的dsDNA浓度。

该浓度随后可利用下方重组的比尔定律方程求得因子（F）值。该因子随后将替换消光系数：

该因子可用于下方重新排列的比尔定律方程，求解吸收度测量的未知浓度，如DS-11系列分光光度计所示：

同样的计算方法也用于确定其他核酸的浓度因子。DS-11还用到的其他因素如下：

ssDNA：33 ng/uL
ssRNA：40 ng/uL

这些浓度因子与其消光系数成反比。在260纳米处，1A所需的核酸量越高，相应的浓度因子越低。

为什么核酸浓度因子不同？

dsDNA、ssDNA和RNA具有不同的化学和结构性质，导致光吸收行为各异。这意味着每种核酸的浓度不同，才能在260纳米波长下达到1.0的吸收率。核酸的以下特性导致了消光系数和浓度因子的不同：

• dsDNA：其双螺旋结构，键彼此接近，氢键将结构连接在一起，导致紫外线吸收率降低。

• ssDNA：其碱基暴露得更明显，不像DSD那样受到碱基堆叠的相互作用影响。

• RNA：核糖和额外的羟基会干扰紫外线吸收。

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核酸浓度因子为利用吸收度计算核酸浓度提供了一种简化的方法。这些变化的数值恰当地考虑了核酸结构差异导致的光吸收模式差异。您可以通过这里的微体积核酸性能数据，了解DS-11系列分光光度计/荧光仪在宽广范围内实现的高精度和线性度。或者联系咨询！