TGIRT™ Improved Modular Template-Switching RNA-seq Kit，

TGIRT™ Improved Modular Template-Switching RNA-seq Kit，描述：

该试剂盒包括TGIRT ^® -III 酶，一种 RNA 和 DNA 寡核苷酸的混合物，可以退火形成包含第一个接头序列的 R2 RNA/R2R DNA 异源双链体、二硫苏糖醇 (DTT)和反应缓冲液以执行 TGIRT ^®模板-用于 Illumina RNA-seq 和 ssDNA-seq 分析的转换反应。^7,8,9,10,12该试剂盒能够合成 RNA 模板的 cDNA 拷贝，第一个 RNA-seq 接头无缝连接到 cDNA 的 5' 端。对于 RNA-seq 文库构建，DNA 寡核苷酸（单独购买）包含在 PCR 扩增之前，必须使用热稳定的 5'AppDNA/RNA 连接酶（New England BioLabs；M0319S 或 M0319L）将第二个 RNA-seq 适配器序列添加到 cDNA 的 3' 端。

套件内容清单：

TGIRT 试剂盒内容（10 次反应或 25 次反应）：

TGIRT ^® -III 酶，1 x 10 ml (KTGIRT-10) 或 3 x 10 ml (KTGIRT-25)

10X 引物混合物，50毫升(PM-110)

10 x DTT，50毫升(D-121)

5 x 反应缓冲液，100毫升(RX-120)

1. 全面的链特异性转录组分析。

TGIRT®-seq 的 ribodepleted、碎片化的通用人类参考 RNA 样本概括了人类转录本和 spike-ins 的相对丰度，与非链特异性 TruSeq v2 相比，优于链特异性 Tru-Seq v3。TGIRT®-seq 比 TruSeq v3 具有更高的链特异性，并消除了 TruSeq 固有的随机六聚体引发的采样偏差。TGIRT®-seq 显示出比 TruSeq 更均匀的 5' 到 3' 基因覆盖率并识别出更多的剪接点。TGIRT®-seq 支持在与结构化小 ncRNA（包括 tRNA）相同的 RNA-seq 中同时分析 mRNA 和 lncRNA，而 tRNA 基本上不存在于 TruSeq 数据集中。^8个

2. 人类全细胞、外泌体、血浆和其他细胞外 RNA 的 RNA-seq。

快速处理时间（通过 PCR 步骤构建 RNA-seq 文库 < 5 小时）；需要少量 RNA（低 ng 范围）；全面的转录本概况，包括 mRNA 和 lncRNA 以及小 ncRNA，包括 tRNA、pre-miRNA 和其他结构化小 ncRNA 的全长读数；不需要 RNA 连接酶；与传统方法相比，偏差更小，效率更高，链特异性更高。^7,8,15

3. 高度结构化和/或大量修改的 RNA 模板的 RNA-seq。

更高的热稳定性、持续合成能力和链位移使得获得 tRNA 和其他结构化/修饰的小 ncRNA 的全长、端到端 cDNA 成为可能，它们对逆转录病毒 RT 具有抗性。^{4-9，12-15。}

4. 通过 TGIRT® 模板转换在 RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖体分析等方法中构建 RNA-seq 文库。

快速处理时间（通过 PCR 步骤构建 RNA-seq 文库 < 5 小时）；需要少量 RNA（低 ng 范围）；不需要 RNA 连接酶，通过减少程序中的步骤减少偏差和提高效率。^1,10,11

5. 人血浆和大肠杆菌 基因组DNA 的 ssDNA-seq。

通过直接在 DNA 链的 3' 端启动 DNA 合成，同时连接 DNA-seq 适配器，无需末端修复、加尾或连接，以更简单的工作流程捕获精确的 DNA 末端。能够分析核小体定位、转录因子结合位点、DNA 甲基化位点和组织来源。¹⁶

上海牧荣生物科技有限公司

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