您好!欢迎访问上海牧荣生物科技有限公司网站!
咨询热线

17621170138

当前位置:首页 > 产品中心 > 实验试剂 > 酶类 > MB112sydlabs:蛋白酶K溶液

sydlabs:蛋白酶K溶液

简要描述:sydlabs:蛋白酶K溶液(肽酶 K、内切蛋白酶 K、内肽酶 K、蛋白酶 K、内肽酶 K、Tritirachium 碱性蛋白酶、Tritirachium 蛋白丝氨酸蛋白酶)

  • 产品型号:MB112
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2023-12-12
  • 访  问  量:441

详细介绍

品牌其他品牌货号MB112
规格100毫升供货周期一个月

sydlabs:蛋白酶K溶液(肽酶 K、内切蛋白酶 K、内肽酶 K、蛋白酶 K、内肽酶 K、Tritirachium 碱性蛋白酶、Tritirachium 蛋白丝氨酸蛋白酶)

蛋白酶 K 溶液通常用于蛋白质消化、DNA 提取、RNA 纯化、直接 PCR 和基因分型。由于它能非常有效地灭活 DNase 和 RNase,因此在核酸制备过程中添加重组蛋白酶 K,以分离高度天然、未受损的 DNA 或 RNA;它用于直接 PCR 试剂盒,通过破坏细胞裂解物(组织或细胞培养细胞)中的蛋白质来进行基因分型,并释放基因组 DNA。

蛋白酶 K 是一种广谱丝氨酸蛋白酶,最初从真菌 Engyodontium album 中分离出来。该蛋白酶因其消化角蛋白的能力而被命名为“蛋白酶 K"。晶体和分子结构研究表明,该酶属于枯草杆菌蛋白酶家族,其活性位点具有催化三联体 (Asp39-His69-Ser224)。蛋白酶 K 酶没有明显的切割特异性,优先切割位点是邻近疏水性氨基酸的肽键。

在还原剂(例如 5 mM DTT)存在下,蛋白酶 K 表现出更高的蛋白水解活性。蛋白酶 K 被丝氨酸蛋白酶抑制剂(例如 PMSF、DFP 和 AEBSF)抑制。

蛋白酶 K 在 1% Triton X-100 中具有活性,在 0.5% (w/v) SDS 中全具有活性,可使蛋白质底物变性以提高消化率。该酶在 50-200 ug/mL、pH 7.5-8.0、37 °C 时效果佳,并且通常会因后续苯酚提取而变性。孵育时间从 30 分钟到 18 小时不等,蛋白酶 K 可以在长时间孵育期间自动消化。

重组蛋白酶 K 是天然蛋白酶的突变体,具有更高的比活性和产量以及更宽的 pH 和温度范围。大规模重组酶生产具有批次一致性、纯度高和成本效益高等优势。重组蛋白酶 K 的无 DNA 性质使其非常适合分离 PCR 和 RT-PCR 模板。

MB112:蛋白酶 K 溶液,PCR 级(20 毫克/毫升)

重组蛋白酶K来自酵母细胞,克隆了编码Engyodontium album(Tritirachium album)内溶蛋白酶的基因。
CAS 号:39450-01-6。
EC:3.4.21.64。
分子量:29.3 kDa。
等电点:8.9。
pH范围:4.5-12.0;在pH 7.5-11.5范围内具有高活性。
单位定义: 1 个单位的蛋白酶 K 定义为在 37°C、pH 7.5 下每分钟从酪蛋白产生 1 umol 酪氨酸的酶活性。
比活性:≥ 780 单位/ml 蛋白质。
温度曲线:建议温度范围 37-70°C; 70°C 时具有最大活性。
消光系数:E 1%= 14.2; 280 nm,10 mM NaCl 和 5 mM CaCl2,pH 8.0。
纯度:对每批 PCR 级重组蛋白酶 K 溶液进行测试,确保不含 RNase、DNase 和 DNA。在 40 µg 蛋白酶 K 与 2 ug RNA 在 37°C 下孵育 2 小时的质量控制程序中未检测到 RNase。在 40 µg 蛋白酶 K 与 1 ug λ DNA 在 37°C 下孵育 6 小时的质量控制程序中未检测到 DNase。该制剂被认为不含 RNase 和 DNase。
配方:0.2 μM 过滤溶液。
浓度:20毫克/毫升。
溶液配制:PCR 级蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 使用 0.22 µm 过滤器进行灭菌,并提供在 50% 灭菌甘油中,以等分试样在 24°C 至 -80°C 的宽温度范围内储存。推荐的蛋白酶 K 稀释缓冲液:20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2;或 20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2 和 2% 甘油。
活化剂:1-5 mM Ca 2+。为了刺激蛋白酶 K 活性,可以添加1-5 mM Ca 2+ 。使用激活剂进行优化可以显着提高蛋白酶活性。添加EDTA除去钙后,酶活性会降低25%。如果 EDTA-Ca 2+酶活性会降低 80%通过凝胶过滤从酶溶液中除去复合物,同时可以通过添加过量的Ca 2+来部分恢复复合物。
抑制剂:DIFP 或 PMSF。蛋白酶 K 被 DIFP 或 PMSF 灭活(PMSF 最终浓度为 5 mM)。然而,它不受 EDTA、碘乙酸、胰蛋白酶特异性抑制剂 TLCK、胰凝乳蛋白酶特异性抑制剂 TPCK 和对氯汞苯甲酸盐的抑制。

运输:PCR 级重组蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 用冰袋运输。收到后,立即将其存放在下面建议的温度下。
稳定性和储存
使用手动除霜冰箱并避免重复冻融循环。
自收到之日起超过 2 年,在 –20°C 下保存。
自收到之日起>1 年,在 2–8°C 下保存。

sydlabs:蛋白酶K溶液

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
扫一扫,关注微信
地址:上海市嘉定区安亭镇新源路155弄16号新源商务楼718室 传真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2024 上海牧荣生物科技有限公司 版权所有 All Rights Reserved.  备案号:沪ICP备2022017655号-1