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UDPG焦磷酸化酶(UPG)测试盒

简要描述:UDPG焦磷酸化酶(UPG)测试盒,尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-04-26
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

UDPG焦磷酸化酶(UPG)测试盒,尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP)试剂盒


注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG)。

测定原理

UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH,340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板

试剂组成和配制

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂五:液体2mL×1瓶,4℃保存。

酶液提取

  1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置冰上待测。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置冰上待测。

  3. 液体:直接检测。

测定操作

  1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

  2. 取微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL试剂一,20μL试剂二,20μL试剂三,20μL试剂四,20μL试剂五,20μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处30s的吸光值A1和330s的吸光值A2,△A=A2-A1

计算公式

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

(3)按照细胞数量计算

酶活单位定义:每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T

=321.54×ΔA÷细胞数量

(4)按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T=321.54×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W

(3)按照细胞数量计算

酶活单位定义:每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T

=643.08×ΔA÷细胞数量

(4)按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T=643.08×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g


上海牧荣生物科技有限公司

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