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α葡萄糖苷酶(α GC)测试盒

简要描述:α葡萄糖苷酶(α GC)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品。α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase, α-GC)试剂盒

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

α葡萄糖苷酶(α GC)测试盒

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。

测定原理:

α-GC分解对-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入12mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

  2. 加样表

试剂名称(μL)

测定管

对照管

试剂一

120


蒸馏水


120

试剂二

150

150

样本

30

30

充分混匀,放入37℃准确水浴30min后,立即放入95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变),8000g,4℃,离心5min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)

上清液

70

70

试剂三

130

130

充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。

每个测定管需设一个对照管。

α-GC活力计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.00585x -0.0027;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值。

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。

α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(V样×Cpr)÷T

=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。

α-GC活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T

=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。

α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T

=0.114×(ΔA +0.0027)

V反总:反应体系总体积,0.3mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,30min。


b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0039x -0.0027;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值。

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。

α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T

=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。

α-GC活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T

=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。

α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T

=0.171×(ΔA +0.0027)

V反总:反应体系总体积,0.3mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,30min。


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