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丙酮酸(PA)含量测试盒

简要描述:丙酮酸(PA)含量测试盒,丙酮酸(pyruvic acid PA)含量测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
  • 访  问  量:55

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

丙酮酸(PA)含量测试盒

丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。 

测定原理:

丙酮酸与2,4-二硝*苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝*苯腙,在碱性溶液中呈显色。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体2.5mL×1瓶, 4℃保存; 

试剂二:液体12.5mL×1瓶, 4℃保存。

丙酮酸提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),静置30min, 8000g,25℃离心10min,取上清待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,25℃离心10min,取上清待测。

3、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min, 8000g,25℃离心10min,取上清待测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

2、在微量石英比色皿或96孔板中加入75μL样本和25μL试剂一,混匀,静置2min,加入125μL试剂二,混匀,于520nm波长处测定管吸光值A。

丙酮酸含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0466x + 0.0675; x为丙酮酸含量(µg/mL),y为吸光值。

2、按照血清(浆)体积计算

丙酮酸含量(μg/mL)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2)=214.6×(A-0.0675)

3、按照蛋白浓度计算

丙酮酸含量(μg/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照样品质量计算

丙酮酸含量(µg/g鲜重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2)=21.46×(A-0.0675) ÷W

3、按照细菌或细胞密度计算

丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2)=0.043×(A-0.0675)

V1:加入反应体系中样本体积,0.075mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0233x + 0.0675; x为丙酮酸含量(µg/mL),y为吸光值。

2、按照血清(浆)体积计算

丙酮酸含量(μg/mL)= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(V3×V1÷V2)=429.2×(A-0.0675)

3、按照蛋白浓度计算

丙酮酸含量(μg/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(V1×Cpr)=42.92×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照样品质量计算

丙酮酸含量(µg/g鲜重)= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(W ×V1÷V2)=42.92×(A-0.0675) ÷W

3、按照细菌或细胞密度计算

丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(500×V1÷V2)=0.086×(A-0.0675)

V1:加入反应体系中样本体积,0.075mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

注意:*低检测限为1μg/mL或1μg/g鲜重或10ng/mg prot


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丙酮酸(PA)含量测试盒



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