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乙醇脱氢酶(ADH)测试盒

简要描述:乙醇脱氢酶(ADH)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

乙醇脱氢酶(ADH)测试盒

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

测定原理:

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。

自备仪器和用品:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,室温保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。               

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存,临用前每瓶加入9mL试剂二,现配现用。

试剂四:液体×1支,4℃保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。

ADH测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。

3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL样本上清液、160μL试剂三和20μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。

计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(Cpr×V样)÷T

=1608×△A ÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(W×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=1608×△A

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T

=3215×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=3215×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=3215×△A÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=3215×△A

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。


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乙醇脱氢酶(ADH)测试盒










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