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己糖激酶(HK)测试盒

简要描述:己糖激酶(HK)测试盒 己糖激酶(hexokinase,HK)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

己糖激酶(HK)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

HK(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶,催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。

测定原理

HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液:100mL×1瓶,4℃保存; 

试剂一:液体20mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;

样本的前处理

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

  2. 样本测定

(1)在试剂二中加入18mL试剂一充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

(2)在试剂三中加入1mL试剂一,充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三和180μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

注意:不同匀浆组织中HK活力不一样,做正式试验之前请做1-2只预试,若ΔA>0.5,则说明组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液(计算公式中乘以相应稀释倍数),或缩短反应时间至2min,使ΔA<0.5,以提高检测灵敏度。

 

 

 

 

 

 

HK活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)HK活性

单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=643×ΔA

2、组织、细菌或细胞中HK活性

(1)按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)HK活性

单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=1286×ΔA

2、组织、细菌或细胞中HK活性

(1)按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=1286×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

HK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=2.572×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

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己糖激酶(HK)测试盒



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