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肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒

简要描述:肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒 肉桂醇脱氢酶( Cinnamyl-alcohol dehydrogenase,CAD)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一,是木质素单体合成反应中的最后一步,催化多种不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

测定原理:

CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下测定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体25 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存;

粗酶液提取:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

  2. 样本测定

(1)在试剂二中加入10mL试剂一充分溶解混匀,室温使用涡旋振荡仪振荡溶解15min,如未溶解可适当延长振荡时间;置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用(配好后24h内用完)

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL试剂二,混匀,立即记录340nm处初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

 

CAD活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

CAD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

CAD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

CAD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

CAD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

CAD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=1286×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

CAD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=2.572×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒



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