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苯丙氨酸解氨酶(PAL)测试盒

简要描述:苯丙氨酸解氨酶(PAL)测试盒 苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase,PAL)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

苯丙氨酸解氨酶(PAL)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

PAL(EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

测定原理

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

所需的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;

试剂三:液体1mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至290nm,蒸馏水调零。

  2. 准备96孔UV板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。

3、在EP管或96孔UV板中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

5


试剂一

145

150

试剂二

40

40

混匀,30℃ 准确反应30min

试剂三

10

10

混匀,静置10min后, 290nm处记录测定管吸光值A1和对照管吸光值A2,△A=A1-A2。

注意:对照管只要做一管

 

PAL活性计算

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

  1. 按蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。

PAL(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(Cpr× V样)÷0.1÷T =13.3×ΔA÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算

单位定义:每g组织在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。

PAL(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.1÷T =13.3×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.005mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

用96孔板测定的计算公式如下

(1) 按蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.05为一个酶活性单位。

PAL(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.05÷T =26.6×ΔA÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算

单位定义:每g组织在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.05为一个酶活性单位。

PAL(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.05÷T =26.6×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.005mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


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苯丙氨酸解氨酶(PAL)测试盒

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