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葡萄糖6磷酸酶(G6P)测试盒

简要描述:葡萄糖6磷酸酶(G6P)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:62

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

葡萄糖6磷酸酶(G6P)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

测定原理:

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH,在340nm下测定NADH生成速率,即可反映G6P活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体19 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;

试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;

试剂四:试剂×1支,-20℃保存;

样本的前处理: 

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

工作液的配制:临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

  1. 将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。

  2. 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

注意:在该试剂盒中,若ΔA大于0.3,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
 

G6P活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)G6P活力计算

单位定义:每毫升血清(浆)每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/mL))=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=1608×ΔA

2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算

(1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=1608×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.215×ΔA

V反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)G6P活力计算

单位定义:每毫升血清(浆)每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/mL))=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=3216×ΔA

2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算

(1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=3216×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位定义:每1万个细胞或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

G6P(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=6.43×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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