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葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒

简要描述:葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GOD(EC 1.1.3.4)广泛存在于动物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生H2O2,是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理

GOD催化产生H2O2,过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在500 nm有特征吸收峰,颜色深浅与GOD活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

缓冲液:液体30mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入10mL缓冲液充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存一个月;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入10mL缓冲液充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存一个月;

样品测定的准备 

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。

  2. 试剂一和试剂二的配制:参见试剂的组成和配制。

3、煮沸样本的准备:取200μL样本至新的EP管中,95℃水浴10min,冷却至室温后,8000g 4℃离心10min,取上清作为对照管的煮沸样本待测。

4、测定操作表

试剂(μL)

对照管

测定管

样本


50

煮沸样本

50


试剂一

75

75

试剂二

75

75

混匀,35'C保温15min后,于500nm波长处读取吸光度。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

GOD活力单位的计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

回归方程为y = 2.8348x - 0.0169;x为H2O2标准品浓度(μmol/mL),y为ΔA。

1、血清(浆)GOD活力的计算

单位定义每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷V样÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)

2、细菌、细胞或组织GOD活力的计算

(1)按蛋白浓度计算

单位定义每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷(V样×Cpr) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/g鲜重)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷(W×V样÷V样总) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷(500×V样÷V样总) ×1000÷T

=0.118×(ΔA+0.0169)

V反总:反应体系总体积,0.125mL; V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,15 min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

 b.用96孔板测定的计算公式如下

回归方程为y = 1.4174x - 0.0169;x为H2O2标准品浓度(μmol/mL),y为ΔA。

1、血清(浆)GOD活力的计算

单位定义每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷V样÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)

2、细菌、细胞或组织GOD活力的计算

(1)按蛋白浓度计算

单位定义每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷(V样×Cpr) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/g鲜重)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷(W×V样÷V样总) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。

GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷(500×V样÷V样总) ×1000÷T

=0.235×(ΔA+0.0169)

V反总:反应体系总体积,0.125mL; V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,15 min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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