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酸性磷酸酶(ACP)测试盒

简要描述:酸性磷酸酶(ACP)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:43

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

酸性磷酸酶(ACP)测试盒

微量法 100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:                           

ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。

测定原理:

在酸性环境中,ACP催化对硝基苯磷酸二钠水解生成4-硝基苯酚,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。

自备仪器和用品:

酶标仪、96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体60 mL×2瓶,4℃保存。

试剂二:液体50 mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体50 mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1 mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、10000g离心10 min,取上清液待测。

  2. 细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1 mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3 min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 血液可直接测定,或者适当稀释后测定。

测定:

1. 酶标仪预热30 min,调节波长到405 nm。

2. 在 EP 管中加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

10

10

试剂一

90

990

试剂二

900


30℃避光保温30 min

试剂三

400

400

混匀,吸取 200µL 加入96 孔板中,405 nm 下测定各管吸光值。ΔA=A测定管-A对照管。

注意:每个测定管需做一个对照管。

ACP活性计算:

标准曲线 y = 7.3336x + 0.0179;R2 = 0.9996;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值ΔA。

1. 血液中ACP活性计算

活性单位定义:30℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。

ACP活力(μmol/min/mL)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷V样

= 0.4545 ×(ΔA-0.0179)

  1. 组织、细菌或细胞中ACP活性计算

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:30℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。

ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(V样×Cpr)

=0.4545 ×(ΔA-0.0179)÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:30℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。

ACP活力 (μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(W×V 样÷V 样总)

= 0.4545 ×(ΔA-0.0179)÷W

(3)按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义:30℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。

ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(细胞数量×V 样÷V 样总)

= 0.4545 ×(ΔA-0.0179)÷细胞数量

V反总:反应体系总体积(mL),1 mL; W :样品质量,g; V样:加入反应体系中样本体积(mL),0.01 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),30 min;500:细胞或细菌总数,500万。

注意事项:

ACP不稳定,尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快,因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备;血清样品中,每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠,使pH降至6.5以下,或5ml血清加入30%醋酸溶液2~3滴,置于4℃可保存1周。


上海牧荣生物科技有限公司

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酸性磷酸酶(ACP)测试盒




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