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锰过氧化物酶(MnP)测试盒

简要描述:锰过氧化物酶(MnP)测试盒 锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

锰过氧化物酶(MnP)测试盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。

测定原理

锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制                 

试剂一:液体110mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体2mL×1支,4℃保存。

试剂三:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体2mL×1支,4℃保存。

酶液提取

  1. 组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 培养液或其它液体:直接检测。                         

测定操作

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至465nm,蒸馏水调零。

  2. 测定前将试剂一、二、三、四在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上。

  3. 样本测定表

试剂名称(µL)

测定管

样本

20

试剂一

100

试剂二

20

试剂三

40

试剂四

20

在微量石英比色皿或96孔板中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上,测定时加入20µL样本和180µL混合液测定。

酶活计算公式

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/g 鲜重)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×W÷V样总)÷T= 413×ΔA÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T

= 413×ΔA÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T= 413×ΔA

ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,2×10-4 L;V样:反应中样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min

  1. 96孔板测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=826×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/g 鲜重)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×W÷V样总)÷T= 826×ΔA÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T

= 826×ΔA÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T= 826×ΔA

ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V反总:反应总体积,2×10-4 L;V样:反应中样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min

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锰过氧化物酶(MnP)测试盒


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