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纤维素酶(CL)测试盒

简要描述:纤维素酶(CL)测试盒 羧甲基纤维素酶测试盒 纤维素酶(cellulase,CL)/羧甲基纤维素酶活性测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

纤维素酶(CL)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CL(EC 3.2.1.4存在于细菌、真菌和动物体内,能够催化羧甲基纤维素降解,是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。

测定原理:

采用蒽酮比色法测定CL催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、浓硫酸和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体40mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存; 临用前加入5mL蒸馏水和45mL浓硫酸充分溶解待用。

样品测定的准备:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

加样表和测定步骤:

试剂名称

对照管

测定管

样本

50

50

试剂一(μL )


90

试剂二(μL )

370

370

蒸馏水(μL )

180

90

37℃振荡反应1h后,90℃水浴15min(盖紧,防止水分散失),冷却后

8000g 25℃离心10min,取上清,得糖化液

糖化液 (μL)

140

140

试剂三 (μL)

260

260

混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,测620nm下吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

CL活力计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x - 0.0462;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、血清(浆)CL活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总]÷V样÷T =39.8×(ΔA+0.0462)

3、细胞、细菌和组织中CL活力的计算

(1)按照蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总]÷(500×V样÷V样总) ÷T

=0.0796×(ΔA+0.0462)

1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反总:反应体系总体积,0.6mL; V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,60 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件测定回归方程为y = 2.5090x - 0.0462;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、血清(浆)CL活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷2.509×V反总]÷V样÷T =79.6×(ΔA+0.0462)

3、细胞、细菌和组织中CL活力的计算

(1)按照蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min /mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反总]÷(V样×Cpr)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反总]÷(W× V样÷V样总)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL活力(μg /min /104cell)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T

=0.1592×(ΔA+0.0462)

1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反总:反应体系总体积,0.6mL; V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,60 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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纤维素酶(CL)测试盒



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