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详细介绍
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | M3009.0250 |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 化工,生物产业,制药/生物制药 |
Genaxxon：SNP Pol DNA Polymerase
出色的 SNP 检测，可可靠区分不同的等位基因
性能优异，特别适用于等位基因特异性 PCR （as-PCR），也是高选择性 PCR 的选择
使用标准引物保证简单的引物设计，您只需改变 3' 核苷酸
保证高灵敏度：在 >10 000 个野生型拷贝中可检测到少于 10 个突变拷贝
由于基于适配体的热启动功能，没有假扩增。
SNP Pol DNA 聚合酶可有效区分 3' 端错配的引物。只有当引物 100% 适合 3'-端时，聚合酶才会扩增。如果引物在 3' 端直接有一个碱基交换（点突变），则不会进行扩增。这种设计的聚合酶也可用作 SNP PolTaq 变体，其具有 5'-3'-核酸酶活性，因此可用作探针 qPCR 中的分子信标或 TaqMan® 探针，用于基于水解探针的检测。
SNP Pol DNA 聚合酶用于简单、可靠和快速的等位基因特异性区分，例如。CRISPR / Cas9 点突变，用于检测不正确的 CRISPR / Cas9 产物，或验证测序结果。SNP Pol DNA 聚合酶可区分高度特异性，无论是否存在引物-模板-复合物的不匹配。错配（点突变）必须在引物的 3 ' 端。因此，突变等位基因可以与野生型等位基因精确区分 - 无需测序，因为聚合酶在错配的情况下根本不扩增。
只需将引物放在假定的点突变上（重要提示：点突变必须在 3 '端），聚合酶就会以几乎 100% 的准确率检测到该区域的错配：如果与引物的 3' 端互补的模板碱基显示突变，而引物没有，则不会发生扩增 - 在短时间内 100% 确定！
因此，SNP Pol DNA 聚合酶可以轻松、省时且经济高效地用于筛选点突变。
变体 SNP PolTaq DNA 聚合酶 > 具有 5'-3'核酸酶活性，因此可用于特异性水解探针，如 Taqman® 探针或分子信标。
描述
SNP Pol DNA 聚合酶是一种高选择性 DNA 聚合酶，用于检测 S单核苷酸 P卵形性。它是专门为等位基因特异性鉴别而开发的，其中需要非常高的鉴别率，例如，在等位基因特异性 PCR （ASA;AS-PCR）、等位基因特异性引物延伸 （AS-PEX）、SNP 分析、基因分型或甲基化特异性 PCR （MSP）。许多其他 DNA 聚合酶可耐受错配的引物-模板复合物，因此不适合。另一方面，SNP Pol DNA 聚合酶可以特异性地区分这些（高鉴别性），并且只提供具有匹配引物对的 PCR 产物！Genaxxon SNP Pol 和 SNP PolTaq DNA 聚合酶通过两个等位基因之间的等位基因特异性 PCR 相差高达 100%，并且在简单的 qPCR 之后，给出了存在哪个等位基因的明确结果。因此，CRISPR/Cas9 技术的巨大潜力可用于人类医学和植物生物技术，尤其是与 SNP PolTaq 或 SNP Pol DNA 聚合酶一起使用。
等位基因特异性 PCR 可用于量化野生型序列池或背景中的突变率。NGS 确定的突变频率的验证也可以通过等位基因特异性 PCR 和 SNP Pol DNA 聚合酶进行验证。SNP PolTaq DNA 聚合酶非常适合液体活检样品的分析。使用 SNP PolTaq，可以很好地分析和量化癌症突变的存在和频率。
下图：应用资料 SNP Pol DNA 聚合酶
我们建议使用较短的扩增子长度（约 60-200 bp）以获得最佳结果，但也建议使用较长的扩增子长度。如果扩增子较长 >500 bp），则可能需要添加额外的镁 （+0.5 - 1.5 mM）。
故障排除：
PCR 30 个循环后没有条带！
缺失或弱条带的优化程序。
退火温度过低！
注意力： SNP Pol 是一种适配体抑制的 DNA 聚合酶。使用的适配体寡核苷酸在 <55°C 的温度下可逆地抑制聚合酶！因此，引物的理想退火温度应为 >57°C。
- real-time PCR 方法
- 检查 dNTP 浓度。这应该在 200 到 300 μM 之间（在 PCR 中）。
- 增加循环次数（至少 35 次，最好等于 40 次）
测试优化 - 循环
次数 在终点检测中，30 个循环计数并不总是足以生成清晰可见的波段。例如，以少于 200 个 DNA 拷贝为起始值。因此，应使用实时 PCR 进行检测，或者应使用五个平行 PCR，其中一个在五个不同循环后从 PCR 设备中取出（示例如下）。
终点检测：
使用 SNP Pol DNA 聚合酶平行构建 5 个相同的 PCR 反应。 在 20、25、30、35 和 40 个循环中分别从循环仪中取出一个 PCR 管，并在最后将所有五个反应应用于琼脂糖凝胶。 这使得很容易识别 PCR 中给定应用（起始材料、靶标、引物）的最佳循环数。
含细胞裂解物
的 SNP Pol PCR 动物细胞和大肠杆菌可直接用于 SNP Pol DNA 聚合酶的 PCR！无需单独裂解或蛋白酶 K 消化。
PCR 程序：
1. 每个 PCR 批次需要 50 - 500 个细胞！
2. 制备带有引物和缓冲液的 PCR 混合物，并置于冰上！
3. 将挑选的菌落直接加入 10-20 μL 水中（无需单独裂解，无需蛋白酶 K 消化）， 短暂涡旋（5 秒），然后将该细胞悬液直接添加到 PCR 反应混合物中，例如 10 μL 细胞悬液，用于 PCR 制备，总体积为 20 μL。2-3 分钟的初始变性时间就足够了 足够，必要时可延长至 5 分钟。
每个反应最多 100 个拷贝的基因组 DNA 相对较低，但应该仍然有效。 该细胞悬液的其余部分也可以冷冻掉，以便进行进一步的测试。
可选：
4。如果可能：进行实时荧光定量 PCR！
SNP Pol DNA 聚合酶（M3009 > 或 M3061 >）可与非特异性荧光染料（例如 Genaxxon 的 Green DNA 染料 > 或 SybrGreen®）一起用于实时 PCR。当使用特异性 PCR 探针时，只能使用 SNP PolTaq DNA 聚合酶，因为只有这些探针具有 5'-3'核酸外切酶活性。
使用我们的高质量 dNTP（> Set （M3015.4100） 或混合 （M3016.1010） > 或我们的 DNALadders > 和我们有利的标准琼脂糖 （M3044） >我们可以为您的 PCR 提供额外的产品。
SNP Pol DNA 和 SNP Pol DNA 聚合酶
的应用领域 - 点突变的监测、验证和检测
- 鉴定正确或错误的 CRISPR/Cas9 产品
- 测序结果
的验证/确认 - 突变的定量（例如 NGS 结果）
- 通过等位基因特异性扩增 （ASA） / 等位基因特异性 PCR
进行 SNP 检测- 亚硫酸氢盐处理 DNA 后的甲基化特异性 PCR （MSP）（CpG 甲基化侧）
- HLA 基因分型
- 微测序
- 使用水解探针进行实时 PCR
- 实时多重 PCR
- DamID-seq data in C. elegans.
As an alternative to ChIP, DNA adenine methyltransferase identification by sequencing (DamID-seq) was recently shown to be able to characterize binding sites in single mammalian cells. Additionally, DamID can be achieved for cell-type specific analysis by expressing Dam fusion proteins under tissue specific promoters in a controlled manner. In this report, we present a user-friendly pipeline to analyse DamID-seq data in C. elegans.
Sharma R, Ritler D, Meister P.
Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925.
- Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in:
Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC.
Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129.
- Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase
Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640
- 监测、验证和检测点突变 - 识别正确或错误的 CRISPR/Cas9 产品 - 测序结果的验证/确认 - 突变定量（例如 NGS 结果） - 通过等位基因特异性扩增 （ASA） / 等位基因特异性 PCR 进行 SNP 检测 - 亚硫酸氢盐处理 DNA 后的甲基化特异性 PCR （MSP） - HLA 基因分型 - 微测序 - 实时 PCR（无需水解探针;使用 SNP PolTaq） - 实时多重 PCR
rec. from E.coli
eclass-Nr: 32-16-05-02
Genaxxon可持续生产和交易。我们的产品尽可能在德国制造。运输时要注意二氧化碳中和。 Genaxxon 专注于PCR和实时定量PCR（qPCR），能够将*的新产品和开发推向市场。在2017年，我们引入了冻干的qPCR 预混液，其形式为珠粒（LyoBalls>），预先分装在试管条或PCR板中或呈粉末状（LyoMix>）。这些预混合料具有液体预混合料的所有优点，但相比之下，在室温下稳定，无需冷却。 这些冻干的预混合物是我们实时荧光定量PCR（qPCR）预混合物的进一步开发。其中包括带有和不带有荧光染料的Green和Probe qPCR主混合物。这些产品针对罗氏（LightCycler?480），Qiagen（Rotor-Gene?），LifeTechnologies（StepOnePlus?）和Applied Biosystems（Mx3005P?）等市场PCR装置进行了专门调整和优化。
上海牧荣生物科技有限公司 是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域，以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及，细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。Genaxxon销售
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