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荧光金抗体使用指南和方案

更新时间:2024-06-25      点击次数:395

image.png在PVN 中注射氟金后,左心室第三侧的下丘脑细胞(40倍)抗体为1/50.000.

抗体的储存和制备

您将收到装在小瓶中的抗荧光金抗体。这是一种在兔子体内产生的多克隆抗体。小瓶中约有 100ml抗体溶液。应立即冷冻并储存在寒冷(-20 摄氏度)、黑暗、干燥的环境中。一台好的商用冰箱的冷冻室(没有无霜功能)就足够了。如果正确且持续地冷冻,抗体溶液可以储存长达一年。

抗体溶液应保持冷冻直至准备使用。100ml抗体的稀释度为 1/100。抗体可在 BSA稀释剂(50 mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中进一步稀释 1/50,000至 1/100,000倍,以产生 50ml至 100ml 的工作滴度。这意味着您可以将收到的溶液稀释 500 至 1,000 倍。如果您使用 Vector elite 试剂盒,这应该可以处理 300至 1000个切片。制备后,抗体溶液可在阴凉(4摄氏度)、黑暗干燥的环境中保存长达七天。优质商用冰箱的冷藏室就足够了。我们不建议在制备后七天后使用该溶液。请勿重新冷冻抗体溶液。

抗体的使用

荧光金可通过多种不同方法注射,包括压力法、离子电渗法和各种研究人员开发的其他应用。参见 Schmued 和 Fallon 的《荧光金:一种具有多种*特特性的荧光逆行轴突示踪剂》,《脑研究》,377(1986)147-154,以及 Pieribone 和 Aston-Jones 的《荧光金在研究深部脑核传入神经中的离子电渗应用》,《脑研究》,475(1988)259-271。许多研究人员已经开发出自己的改良程序。抗体的使用不应依赖于使用荧光金的方法。

注射荧光金后,将漂浮切片(我们使用了灌注了 4%甲醛的大鼠的 30 微米切片)与荧光金抗体溶液在4摄氏度下孵育过夜。清洗切片,然后在室温下以 1/1000 的比例在生物素化 GAR(Vector Labs)中孵育1小时,然后再次清洗。然后将切片以 1/1000 的比例在亲和素/生物素(Vector Labs)中孵育1小时,清洗并转移到 01M酷酸钠中的二氨基联苯胺(0,04%)和化镍(2.5%)中,加入 0.06%H202 六分钟。然后清洗、安装、干、脱水并盖上盖片。

根据我们的经验,如果按照上述方式储存和制备,如果您:使用 Vector elite 试剂盒,每瓶抗体应该可以治疗 300到 1000 个 30 微米的白化大鼠脑切片(或类似大小的动物)。但是,您应该尝试不同的浓度和程序,以确定哪种*适合您的情况。

Ki-67 抗体-W 使用指南和方案

一般的:

Ki-67 抗体-W与 Ki-67 蛋白发生反应。Ki-67蛋白是持续细胞增殖的内在标记,存在于细胞周期的所有活跃阶段(G1、S、G2 和有丝分裂),而不存在于静息细胞(GO)中。这意味着它是确定特定细胞群生长分数的极*标记。它广泛用于诊断、研究和药物发现区用。Ki-67 抗体-W 是多克隆抗体,在兔子体内培养成人类肽序列-TPKEKAOALEDLAGEKELFOT-它在注射到兔子体内之前通过戍二醛与甲状腺球蛋白偶联。我们的抗体已用于大鼠和人脑组织的免疫细胞化学。它将与吸收特定肽的滤纸一起出售,用于阻断。这使研究人员能够确认特定信号

Ki-67 抗体-W 的表征

image.png

A.7日龄大鼠海马中的 Ki-67 阳性细胞(10X)B.共聚焦显微镜下拍摄的海马中的 Ki-67细胞(60X)

C.海马中的 Ki-67 阻断 (10X)

通过阻断研究确定特异性。将7日龄大鼠海马的相邻切片与 Ki-67 抗体-W单独孵育(A-10X)和(B-60X)或与Ki-67抗体-W与Ki-67 肽预孵育(C-10X)-起孵育。注意 A和 B 中的标记以及 C 中的无标记,表明抗体结合的特异性。

储存和准备:

您收到的药瓶中含有约 200ml 溶液,稀释度为 1/100。Ki-67Antibody-W可在 BSA稀释剂(50mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中进一步稀释至至少 1/20.000。

抗体应储存在-20C下。还包括用特定肽吸附的滤纸以进行阳断。可将 500ul稀释抗体加入管中以达到 10uM 阳断。在应用于组织之前,在室温(RT)下孵育至少1小时。该抗体特异性地阻断此肽,而不会阻断滤纸上吸附的其他肽。

势议:

将新鲜冷冻的 10-30 微米切片在室温下用 4%多聚甲醛(EA)固定1小时,用磷酸盐缓冲盐水 (PBS)清洗,然后在 90C下用 10% 柠学酸钠处理 40 分钟。将切片在柠標酸钠溶液中冷却 20 分钟,用 PBS 清洗,并与 PBS 中的 0.至 0.3% H202 一起孵育 10 至 30分钟。再次用 PBS 清洗组织,然后用亲和素/生物素阳断试剂盒(Vector-cat #SP-2001)处理,清洗后在室温下用 BSA 稀释剂孵育1小时。将 Ki67抗体(1/20,000)在室温下过夜应用于组织。用 PBS 清洗后,将切片在1/1000 生物素化的 GAR(Vector labscat#BA1000)中在室温下孵育1小时,清洗后在 1/1000亲和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中在室温下孵育1小时。

Ki-67 抗体-W也适用于 Fluorochrome,LLG销售的 BRDU 抗体-W可视化方案。但是,可以使用 4% FA 灌注组织代替新鲜冷冻切片。

出版物:

Perez 等人,《神经科学杂志》,2009年5月13日:29(19):6379-6887Garcia-Fuster等人,正在准备中:实验者注射可*因后成人海马神经发生的个体差异。

GEAP 抗体-W 使用指南和方案

概述:

GFAP 抗体-W 与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)发生反应,GFAP是 I 类中间丝,是星形胶质细胞中中间丝的主要成分,可作为成熟胶质细胞的细胞特异性标记。它可用作神经干细胞和星形胶质细胞的标记,包括许多类型的源自表达 GEAP 的星形胶质细胞的脑肿瘤。GEAP 抗体-W是多克峰抗体,在兔子体内培养成肽序列 NAGEKETRASERAE(人、大鼠和小鼠),通过成二醛与甲状腺球蛋白偶联,然后注射到兔子体内。我们的抗体已用于大鼠和人脑组织的免疫细胞化学。它还将与吸收特定肽的滤纸一起出售,用于阳断。这使研究人员能够确认特定信号。

GFAP 抗体-W 的表征

image.png

A.成年大鼠海马中的 GFAP 胶质细胞 (10X)

B.共聚焦显微镜下拍摄的海马中的 GFAP 胶质细胞(60X)

C.海马中的 GEAP 阳断 (10)

通过阳断研究确定特异性。将成年大鼠海马的相邻切片单独与 GEAP 抗体-W(A-10X)和(B-60X)一起孵育,或与 GEAP抗体-W与 GFAP 肽预孵育(C-10X)一起孵育。注意胶质细胞中的A和 B标记以及 C 中无标记,表明抗体结合的特异性。

储存和准备:

您收到的试剂瓶中含有约 200ul稀释度为 1/100 的抗体。抗体可在 BSA稀释剂(50mM KPBS、0.4% Triton、1% BSA、1%NGS)中进一步稀释至至少 1/30,000。

抗体应储存在 -20C下。还包括用特定肽吸附的滤纸以进行阳断。可将 500ml 稀释抗体加入试管中以达到 10 uM 阻断。在应用于组织之前,在室温(RT)下孵育至少1小时。该抗体可特异性地阻断此肽,而不会阻断滤纸上吸附的其他肽。

协议:

将新鲜冷冻的 10-80 微米切片在室温下用 4%多聚甲醛(FA)固定1小时,在磷酸盐缓冲盐水 (PBS)中清洗,并与 PBS 中的 0.1至0.3% H202 一起孵育 10 至 30分钟。再次在 PBS 中清洗组织,然后用亲和素/生物素阳断试剂盒(Vector-cat #SP-2001)处理,清洗后在室温下用 BSA稀释剂孵育1小时。将 GEAP 抗体-W(1/30,000)在室温下应用于组织过夜。在 PBS 中清洗后,将切片在室温下在 1/1000 的生物素化 GAR (Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小时,清洗后在室温下在 1/1000 的亲和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中孵育1小时。清洗后,用 0.1M乙酸钠中的二氨基联苯胺(0.04%)与 0.06% H202 混合溶液浸泡六分钟以观察信号(也可添加 2.5%的氯化镍)。

GFAP抗体-W也适用于 Fluorochrome,LLG 销售的 BRDU抗体-W可视化方案。但是,可以使用 4% FA 灌注组织代替新鲜冷冻切片。

BrdU 抗体-W 使用指南和方案

概述:

该抗体与合成的胸苷类似物 BrdU 发生反应,当 BrdU 注射到动物体内时,它会在细胞周期的S期被整合到活跃增殖细胞的新合成DNA 链中。可以通过免疫细胞化学测量存活的细胞数量。作为评估一组细胞增殖状态的出色工具,它已成为药物发现研究的关键,尤其是在癌症治疗和 ADME/TOx 研究期间确定细胞健康状况方面。BrdU 抗体-W 是在兔体内产生的多克隆抗体,可抵抗与牛血清白蛋白(BSA)结合的 BrdU。我们的抗体已用于大鼠脑组织的免疫细胞化学。它将与吸收了 BrdU 的滤纸一起出售,用于阻断。这使研究人员能够确认特定信号。

BrdU 抗体-W 的表征

image.png

A.成年大鼠齿状回中的 BrdU 阳性细胞(60X),之前已注射 BrdU。共聚焦显微镜拍摄的照片B.齿状回中的 BrdU 阻断

通过进行阳断研究确定特异性。将之前注射过 BrdU 的成年大鼠海马的相邻切片单独与 BrdU 抗体-W(A-60X)孵育,或与与 BrdU 预孵育的 BrdU 抗体-W(B-60X)孵育。注意A中的标记和 B中的无标记,表明抗体阻断的特异性。

储存和准备:

您收到的试剂瓶中含有约 200ml的稀释度为 1/100 的试剂。BrdU Antibody-W可在 BSA稀释剂(50mM KPBS、0.4%Triton、1% BSA、1% NGS)中进一步稀释至至少 1/80,000。

抗体应储存在 -20C下。还包括用 BrdU 吸附的用于封闭的滤纸。可将 500m1稀释抗体加入试管中,以达到 10 μM 封闭。在应用于

组织之前,在室温(RT)下孵育至少1小时。该抗体特异性地封闭 BrdU,而不会封闭滤纸上吸附的其他肽。

势议:

将新鲜冷冻的 10-80 微米切片在 4%多聚甲醛(EA)中在室温下固定1小时,在磷酸盐缓冲盐水 (PBS)中清洗,然后在 65C下用50% 甲酰胺/2X SSC(300 mM 氢化钠和 30 mM 柠檬酸钠)处理 2小时。将切片在 2X SSC 中清洗,在 37C下在 2N HCL中孵育 80 分钟,然后在室温下直接放入 100mM 硼酸钠(pH 8.5)中 10 分钟。将切片在 PBS 中清洗,并与 PBS 中的 0.1至 0.3%H202.孵育 10 至 80 分钟。再次在 PBS 中清洗组织,然后用亲和素/生物素阳断试剂盒(Vector-cat #SP-2001)处理,清洗并与BSA 稀释剂在室温下孵育1小时。将 BrdU 抗体-W(1/30,000)在室温下过夜应用于组织。在 PBS 中清洗后,将切片在室温下在1/1000 的生物素化 GAR(Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小时,

*注意:荧光金、荧光金抗体、荧光红宝石、KI-67 抗体-W、GEAP 抗体-W和 BrdU 抗体-W 仅供实验室研究动物或体外试验研究使用。不得用于人体。这些药物应仅供定期从事神经解剖学研究和体外试验的人员或仅用于实验室研究的动物使用。

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