紫外-可见分光光度法的工作原理

有许多方法适用于定量样品中核酸的数量，但紫外-可见光吸光度法是确定样品中 DNA 或 RNA 浓度和纯度的主要方法。

单链和双链 DNA 都强烈吸收峰值吸光度波长为 260nm 的紫外线。简单的浓度和纯度测量涉及直接以微量方法或包含在塑料或玻璃比色皿中穿过样品的光谱。根据 Beer-Lambert 定律，光穿过样品的衰减与浓度和光穿过样品的距离成正比

DNA 可以吸收亚可见光谱上光的目标物质。各种蛋白质的芳香族氨基酸和核糖核酸 （RNA） 都吸收大约 260 – 280nm 的光。鉴于难以确保样品的绝对纯度，样品可能含有各种可能导致紫外吸光度的污染物。这可能会导致高估样品中 DNA 的浓度。评估这些污染物对测量影响的纯度比用于识别潜在的样品问题。

紫外-可见分光光度法的工作原理

紫外-可见分光光度计配备了一个或多个入射光源通道，覆盖了整个紫外-可见 （UV-Vis） 电磁光谱 （190 – 840nm）。分析人员使用特定波长范围内的光脉冲选择性地询问分离的样品。紫外-可见光检测器实时获取样品的透射光谱，从而获得样品总光谱输出的高分辨率测量值。这种分辨率和测量准确度对于根据目标分析物的光谱指纹图谱定量目标分析物至关重要。

使用 DeNovix 对 DNA 进行紫外-可见光定量

DeNovix 一直参与超微量技术的开发，他们的执行官曾是 NanoDrop™ Technologies Inc. 的创始合伙人兼总裁。此后，DeNovix 开发了紫外-可见分光光度计之一，具有很高的精度和市场上最宽的动态范围。