细胞计数是一种需要多种不同技术可供选择的程序,其中大多数技术都依赖于专门的实验室设备。尽管现代生命科学应用可用的细胞计数仪多种多样,但它们通常可分为两个子组之一:手动和自动细胞计数仪。
血球计数器是手动细胞计数中常用的载玻片类型。载玻片包含一个腔室,下表面带有蚀刻网格。该设备最初是为血液样本分析而开发的,但现在广泛用于各种哺乳动物细胞的细胞计数和活力分析。
显微镜载玻片包含两个独立的计数室,这些计数室蚀刻有精确尺寸的精确网格。将盖玻片放置在载玻片顶部以形成计数室的顶部,将深度设置为已知高度。然后可以轻松计算体积。
可以在有或没有染色的情况下进行手动细胞计数。对于活力评估,通常使用台盼蓝等排阻染料。将细胞与染料混合并孵育,然后移液到测量室中。
一旦样品通过毛细管作用填充计数室,就可以使用显微镜直接观察细胞,并在网格上的特定扇区进行计数。尽管台盼蓝被广泛用作一种方法,但在评估细胞活力方面存在许多有据可查的限制。台盼蓝用于计数死细胞;染料被排除在膜完整的细胞之外,因此只有死细胞被染成蓝色。该过程复杂,细胞颜色通常难以解释。因此,这个过程是非常主观的。它还对细胞有毒,导致活力发生变化,这与样本的健康状况无关。
手动细胞计数仪的优点是初始购买价格低和持续运营成本,尤其是考虑到使用带有一次性塑料载玻片的自动细胞仪的成本大幅增加时。
手动细胞计数的主要缺点是:
主观性:它需要人工解释什么是细胞并评估活/死细胞,导致作员之间的错误率很高。
慢速:计数和记录大量细胞是一个费力、耗时的过程,需要对相对少量的细胞进行计数。血球计数器必须在样品之间清洁干净。
体积误差:移液误差和盖玻片选址不当会导致测量不准确。
现有的自动细胞计数仪的优势在于,在很大程度上消除了细胞计数工作流程中的人类主观性。它们通常也比手动计数更快,并且可以计数更多的细胞,从而提高统计准确性。然而,由于一次性塑料载玻片或耗材的持续成本很高,他们通常无法证明细胞计数和活力分析的成本是合理的。DeNovix 开发了一种专有技术,无需一次性塑料载玻片即可进行超精密细胞计数和活力检测。这项创新将手动细胞计数的低成本与自动计数的高速和高精度相结合。
CellDrop自动细胞计数仪具有一个可变高度的样品室,由两个一直、平行的光学蓝宝石表面形成。通过高精度内部机构,这些表面可以调整以形成具有精确高度的样品室,从而消除了体积误差的风险。 DirectPipette™技术同时解决了手动细胞计数仪的准确性问题以及上一代自动细胞计数仪的成本低下和对环境的影响。然而,CellDropseries 的优势不仅限于细胞计数的准备阶段。它配备了明场和双荧光功能,能够通过更具选择性和精确的分析方法以及简单的台盼蓝细胞活力评估来询问样品。