如何使用 OD600 测量和因素确定微生物培养物的细胞密度？

在 600 nm 处测量光密度 （OD） 是确定细菌或酵母培养物密度的常用分光光度法，通常在细菌或酵母生长阶段。OD600 测量是一种快速便捷的测定细胞密度的方法，这些细胞通常是单细胞的、太小且运动的，无法使用典型的基于图像的显微方法进行计数。

可以建立与特定细胞类型的预期密度相匹配的目标 OD 600 值，以简化相同样品类型的未来测量。这是微生物实验室在细胞生长的各个阶段检查和维护样品的一种简单方法，包括细胞周期的滞后期、对数期（也称为指数期）和稳定期。

了解 OD 测量的当前限制

虽然分光光度计是进行这种测量的好工具，但 OD 实际上是光散射的量度，而不是真实吸光度的量度。因此，测得的 OD 受细胞类型的大小和形状、样品活力或生长期、分光光度计的光学配置以及光谱仪的线性范围等因素的影响。

为了考虑影响测量 OD 的因素，建议根据生长曲线凭经验确定目标 OD 600 值。通过将测得的 OD 600 值与每种细胞类型的集落形成单位 （CFU） 板计数相关联来创建生长曲线。

一旦建立了生长曲线并确定了细胞类型的目标 OD，就可以使用测量模式或分光光度计之间的转换因子来使用不同的光学配置。例如，DS-11 系列分光光度计超微量模式采用与 DS-11 系列比色皿模式不同的光学配置，因此在两种模式下测量的样品将检测不同的光散射。

在这种情况下以及使用不同品牌或型号的分光光度计时，转换因子很有用。该系数的计算方式如下所示：

在上述情况下，在 DS-11 系列微量和比色皿模式之间切换时，计算转换因子特别有用。对于测量的光程，基于比色皿的仪器的线性范围通常在上限限制为 1.5 吸光度单位 （AU） 左右。这可能不够高，无法覆盖给定样品的生长周期，并且可能与生长不成线性关系。

微量模式使用较短的光程，因此可以更准确地测量密度较大的样品，而无需稀释。这样可以更好地跟踪指数生长、子细胞的产生和整体细胞分裂，尤其是在各种环境条件下生长的细菌种群和细菌菌落中。