吸光度分析和荧光分析是两种不同但互补的技术,用于检测和定量样品中的目标分析物。测量特定波长的紫外光和可见光 (UV-Vis) 的吸光度是定量生物分子的成熟方法之一。同时,荧光分析长期以来一直用于测量荧光团与波长激发的样品结合的发射光谱,以进行高度特异性的分子定量。
吸光度和荧光分析在生命科学实验室中通常用于测量小体积样品。微量分光光度计能够检测 1 μL 样品中低至 0.75 ng/μl 的双链 DNA。使用 DeNovix 高灵敏度检测试剂盒进行荧光分析可产生皮克 (pg) 级灵敏度,可实现低至 0.005 ng/μl 的检测。
测量的动态范围也是比较方法的一个考虑因素。就测量范围的宽度而言,吸光度优于荧光分析。以 dsDNA 为例,荧光定量试剂盒广泛的检测范围可达 4000 ng/μl,而微量分光光度计中的上限目前为 37500 ng/μl。
吸光度分光光度计直接测量样品吸收的特定波长的量,无需稀释或分析制备。相比之下,荧光分析需要将目标样品与检测试剂盒中的荧光试剂结合。还必须将样品与已知浓度的类似样品进行比较。因此,在进行荧光定量分析时,有必要准备和测量标准曲线。
虽然荧光的特异性有利于评估目标分析物的浓度,但所得数据无法深入了解样品中的任何污染。相比之下,可以通过在一系列波长范围内进行吸光度光谱测量来推断出许多不同的污染物。评估 260/280 nm 和 260/230 nm 等比率可提供有价值的信息,并且可以作为样品质量控制制度的一部分实施。
DeNovix 认识到将吸光度和荧光分析结合到一个综合设备中的好处,使科学家能够利用每种方法的优势。我们的 DS-11 系列将市场上灵敏的超微量紫外-可见分光光度计与集成荧光计相结合。这提供了宽动态范围和更高的灵敏度,以及特异性分析物定量和污染物检测。