生物药检测使用加拿大AffinityImmuno试剂盒的方法要点

　　基质效应产生的来源，来自样本内部各类内源组分，血清、血浆样本含有内源抗体、各类蛋白、脂质、细胞因子，这些组分有可能和试剂盒当中固相抗原或者抗体发生非特异性结合，改变显色信号，造成检测值高于或者低于真实浓度。不同个体来源的生物样本，基质组分存在差异，部分样本会出现明显基质干扰，而同批次其他样本干扰微弱，这种个体差异，没有办法单纯依靠说明书规避。开展正式实验之前，可以收集多份来自健康个体的空白基质样本，把已知浓度的待测物加入空白基质，对比缓冲液体系当中的回收水平，以此评估基质带来的影响程度。

　　基质干扰如果不加以处理，定量结果会失去参考价值，行业内常用3种方式缓解基质效应，分别是样本稀释、基质匹配标准曲线、样本前处理。样本稀释操作简单，但过高倍数稀释，会让待测物浓度落在试剂盒检测下限附近，放大检测误差，稀释倍数需要兼顾干扰抑制与检测区间。基质匹配标准曲线，是把校准品加入空白基质当中，而不是单纯使用缓冲液配制，让校准体系和待测样本处在一致基质环境，以此抵消部分基质带来的偏移。部分样本脂质含量偏高，简单稀释无法消除干扰，就需要搭配前处理步骤，但前处理流程会造成待测物损失，需要同步评估前处理之后的回收率。

　　除基质效应之外，还要关注检测的选择性，也就是样本当中结构类似物质会不会干扰目标物测定。生物药研究过程，部分样本内存在结构相近的分子，这类分子有机会和试剂盒当中的识别组分发生结合，给出假阳性读数。可以配制不同浓度的结构类似物，加入空白基质，观察试剂盒是否会产生信号，确认在实验浓度范围之内，类似物质不会带来明显干扰。很多项目容易忽略选择性评估，当待测样本存在复杂背景，就容易出现难以解释的阳性结果，消耗大量时间排查原因。

　　定量区间的确认同样属于方法学验证的组成部分，试剂盒标注的区间，大多基于特定基质条件得到，当待测基质不一样，高低浓度端的表现会发生变化。可以设置高、中、低3个浓度的质控样本，分散在整个定量范围，穿插在每一块酶标板当中，监控整块板检测波动。每一轮实验，都要同步运行质控样本，借助质控样本的检测结果，判断整块板的数据是否可以接纳，不达标就需要重新开展整板检测。部分课题组只做待测样本，缺少随板质控，一旦整板出现漂移，全部样本数据都失去价值。

　　免疫学定量检测，试剂盒只是工具，基质效应、选择性、随板质控共同构建方法学基础。加拿大AffinityImmuno试剂盒为生物制药免疫学检测提供方案，而贴合项目样本特征的验证工作，是获得合规可用数据的重要保障。