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当前位置:首页 > 产品中心 > 实验试剂 > 其他试剂 > AT1773Cmctag Alapca 纳米抗体试剂

Cmctag Alapca 纳米抗体试剂

简要描述:Cmctag Alapca 纳米抗体试剂 CMCTAG于20012年在威斯康星州密尔沃基成立,是免疫学和细胞生物学试剂的。CMCTAG提供世界上抗体选择之一,以及用于生命科学研究和诊断的原代细胞。 Cmctag销售 Cmctag产品供应 GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊驼纳米抗体偶联磁珠

  • 产品型号:AT1773
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2023-06-09
  • 访  问  量:629

详细介绍

品牌其他品牌供货周期一个月
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药

Cmctag Alapca 纳米抗体试剂

GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊驼纳米抗体偶联磁珠 目录号:AT1773

5 mL(200 次反应)
10 mg/ml


由于检测细胞内维多利亚水母绿色荧光蛋白 (GFP) 仅需要紫外线或蓝光照射,因此它为监测活细胞中的基因表达和蛋白质定位提供了好的手段。 

 

抗 GFP 磁珠是一种羊驼单域抗体,通过酰肼键共价连接到磁珠上。该抗体在融合蛋白的 N 端、C 端和内部位置结合 GFP。

  • 描述

  • GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 标签纳米抗体(来自羊驼 VHH,单域抗体)偶联磁珠

  • 反应性

  • 抓取在大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞或体外转录/翻译系统中表达的转染 GFP 融合蛋白。 
    所有表达 GFP 融合蛋白的系统都是合适的。

测试应用
免疫沉淀(IP)
共免疫沉淀(Co-IP),
染色质免疫沉淀(ChIP)
RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)
酶测定
质谱法
亲和纯化
在IP中,25µL的珠悬浮液用于约500µL的粗总细胞裂解物溶液。
最佳稀释度/浓度应由最终用户确定。

特性
免疫原
这种纳米抗体是用带有 GFP 蛋白的羊驼制成的。
形成
磁珠共轭抗 GFP 纳米抗体,该产品在 10 mM PBS、pH 7.4 和作为防腐剂的 0.02% (w/v) 叠氮hua钠中提供。
储存说明
储存于 4 °C。不要冻结


该抗体为纳米抗体,来自aplaca,其优点如下:

 

• 快速、可靠和高效的一步免疫沉淀

 

• 即用型、高稳定性、高亲和力

 

• 下游 WB 无重抗体链和轻抗体链干扰

 

• 在苛刻的洗涤条件下稳定

 

• 适用于下游质谱、CoIP、ChIP、RIP、蛋白质纯化等

 

• 适用于以下样本:哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等。

结构图

image.png



    • 结合能力

    • ~1mg GFP 蛋白/ml 珠悬浮液

    • 珠子直径

    • ~ 40 微米

  • 应用

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  • 在下游 WB 和质谱分析中不会干扰传统抗体重链和轻链

  • 一步免疫沉淀

  • 高度特异性结合

  • 低背景

  • 高亲和力

  • 稳定性高

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哺乳动物细胞裂解物中 GFP 融合蛋白的免疫沉淀 (IP/CoIP) 方案

 

该方案旨在对 GFP 标记的融合蛋白进行免疫沉淀,以通过蛋白质免疫印迹或活性测定进行分析。

 

溶液和试剂
1X 细胞裂解缓冲液:50 mM Tris (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1% Triton X-100。建议在使用前添加 1 mM PMSF。

 

1X 洗涤缓冲液:TBS(50 mM Tris HCl,150 mM NaCl,pH 7.5)

 

5X SDS 上样缓冲液

 

1. 准备细胞裂解物
1. 要在非变性条件下收获细胞,去除培养基并用冰冷的 PBS 冲洗细胞一次。去除 PBS 并向每个板(10 cm,106-107 个细胞)中加入 0.5 mL-1mL 1X 冰冷细胞裂解缓冲液(添加蛋白酶抑制剂混合物和 PMSF),并将板在冰上孵育 30-40 分钟,4 °旋转摄氏度。
2. 从平板上刮下裂解的细胞并转移到微量离心管中。继续冰上。
3. 在冰上对样品进行超声处理 3 次,每次 5 秒(可选步骤)。
4. 4°C、14,000 xg 微量离心 10 分钟,将上清液转移到新管中。如有必要,可将裂解物储存在 –80°C 下。

 

注意:如果目的蛋白是核蛋白,请使用RIPA裂解液裂解细胞,并加入PIC、1mM PMSF、2.5mM Mgcl2和1mg/ml DNase I。

 

2. 平衡珠子
1. 颠倒产品管或轻轻上下吹打以重悬珠子。不要涡旋珠子。
2. 吸取 25 µL 珠浆到 EP 管(1.5 mL)中,然后加入 1 mL 冰冷的洗涤缓冲液。用手轻轻摇晃 1-2 分钟。不要涡旋珠子。
3、磁选60秒。 
4. 弃去上清,重复洗涤 3 次。

 

3. 免疫沉淀
1. 取 500 μL 细胞裂解液,加入 25 μL 抗体偶联磁珠悬液,4°C 孵育 1-3 小时或 4°C 过夜。

 

4. 清洗蛋白质-纳米抗体-珠复合体
注意:如果研究了 Co-IP 相互作用的蛋白质,请减少洗涤次数,并降低洗涤缓冲液的离子强度。

 

加入 1.0 mL 的 Wash Buffer 并悬浮珠子复合物,磁选,然后弃去上清液。重复上述步骤至少四次。

 

5. 下游分析的洗脱
GFP 融合蛋白的洗脱-根据蛋白质特性或进一步用途推荐两种洗脱方法: 

 

选项 A:天然洗脱
在酸性条件下用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脱。这是一种快速有效的洗脱方法。用中和缓冲液(1 M Tris,pH 10.4)中和洗脱的蛋白质可能有助于保持其活性。中和缓冲液需要预先放入收集管中。

 

注意:需提前做初步实验,确定中和甘氨酸(PH 2.5)需要多少中和缓冲液

 

选项 B:SDS-PAGE 的变性洗脱
在凝胶电泳和免疫印迹的变性条件下用样品上样缓冲液洗脱。

   

A:用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脱 - 该过程应在室温下进行。
注意:不要将珠子留在该缓冲液中超过 20 分钟。

 

1. 向每个样品和对照珠复合物中加入 50 µL 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5)。
2. 在 4°C 下轻轻摇动或在旋转器上孵育样品和对照 5-10 分钟。 
3. 将试管放入磁力分离器中以收集珠子。将上清液转移到含有 25-35 μL 中和缓冲液的新管中。小心不要转移任何珠子。 
4. 重复步骤 1-3 以提高洗脱效率,将洗脱液集中在同一管中或通过不同管收集洗脱液。 
6. 如需立即使用,请将洗脱液储存在 2-8 °C。储存在 –20 °C 以进行长期储存。 

 

B:用 SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱
1. 用 30 µL 1X SDS 样品上样缓冲液重悬每个样品(6 µL 5X SDS 样品上样缓冲液可以添加到 24 µL 细胞裂解缓冲液中)。涡流。
2. 在 95 – 100°C 下将样品管和对照管煮沸 10 分钟。 
3. 将试管放入磁力分离器中以收集珠子。将上清液转移到新管中。样品和对照已准备好加载到 SDS-PAGE 上,并使用抗 GFP 或针对融合蛋白的特异性抗体进行免疫印迹。

上海牧荣生物科技有限公司 是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域,以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及,细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。

Engibody Biotechnology,Inc被Engibody Biotechnology,Inc.收购。Engibody  是用于信号转导途径的试剂产品的。我们为免疫学,肿瘤学,细胞生物学,干细胞生物学和细胞凋亡提供抗体,抑制剂和试剂的全面创新的产品组合。Engibody 通常首先将关键试剂推向市场,  然后 开发了800多种用于抗体和抑制剂的产品。

除抗体外,  Engibody  还提供用于细胞因子,生长因子和原代细胞的多种试剂。我们为生物系统分析提供完整的解决方案。

Engibody  已成长为所有实验室试剂(包括抑制剂,抗体和细胞因子)的可靠供应商。 Engibody  近建造了一个全新的先进设施,以适应其不断增长的产品线。

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