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当前位置:首页 > 产品中心 > 实验试剂 > 试剂盒 > JYM0542Mo小鼠白细胞介素13(IL-13)ELISA kit

小鼠白细胞介素13(IL-13)ELISA kit

简要描述:小鼠白细胞介素13(IL-13)ELISA kit,产品编码:JYM0542Mo
Mouse Interleukin 13(IL-13) ELISA Kit
有效期:6个月
保存条件:2-8℃

  • 产品型号:JYM0542Mo
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2023-04-07
  • 访  问  量:185

详细介绍

品牌基因美供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合

小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA Kit,产品编码:JYM0457Mo

小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA KitMouse Interleukin 13(IL-13) ELISA Kit

【实验方法】双抗体夹心法‍

【种属】小鼠

【检测范围】 见说明书

【检测波长】450 nm

【样本类型】血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本

【反应时间】 1.5~2h


小鼠白细胞介素13(IL-13)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供科研使用。

本试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中白细胞介素13(IL-13)的含量.

有效期:6个月

保存条件:2-8℃

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素13(IL-13)水平。用纯化的小鼠白细胞介素13(IL-13)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素13(IL-13),再与HRP标记的白细胞介素13(IL-13)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素13(IL-13)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素13(IL-13)浓度。

试剂盒组成

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样本处理及要求

1.血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 

2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 

3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在第一、第二孔中分别加标准品 100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉,再各取 50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl,浓度分别为 90pg/ml, 60pg/ml,30 pg/ml,15pg/ml, 7.5 pg/ml)。

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2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 

3. 加酶:每孔加入酶标试剂 50ul,空白孔除外。 

4. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

5. 配液:将 30(48T 的 20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T 的 20 倍)倍稀释后备用。 

6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。 

7. 显色:每孔先加入显色剂 A50ul,再加入显色剂 B50ul,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 10 分钟. 

8. 终止:每孔加终止液 50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 

9. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

注意事项

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

6. 底物请避光保存。 

7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 

9. 本试剂不同批号组分不得混用。 

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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试剂盒性能

1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.92 以上。

2.批内与批间应分别小于 9%和 15%.

检测范围

1.2pg/ml -100pg/ml


上海牧荣生物科技有限公司

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