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当前位置:首页 > 产品中心 > 实验试剂 > 其他试剂 > FNK-DM270diagnocine:DIG Labeled Blue Color Marker for Small

diagnocine:DIG Labeled Blue Color Marker for Small

简要描述:DIG 标记的小 RNA 蓝色标记:diagnocine:DIG Labeled Blue Color Marker for Small RNA

  • 产品型号:FNK-DM270
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-01-03
  • 访  问  量:349

详细介绍

品牌其他品牌货号FNK-DM270
供货周期一个月应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,制药

diagnocine:DIG Labeled Blue Color Marker for Small RNA

DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物由彩色(蓝色)和 DIG 标记的 6 个单链核酸组成,其表观分子量为 RNA 的 100、75、50、40、30 和 20 个碱基。该标记物适用于监测变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和抗 DIG 抗体的免疫检测

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图 1. DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物 (5 μl) 在 15 % 聚丙烯酰胺 - 7.5 M 尿素凝胶/1 × TBE 缓冲液作为运行缓冲液上的电泳图谱。


DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物中条带的表观大小与未染色 RNA 的大小非常一致,长度为 100、75、50、40、30 和 20 个碱基(准确度约为 95%,参见表 1) )。用于小 RNA 的 DynaMarker DIG 标记蓝色标记物以即用型混合物形式提供,使用前不需要加热或添加变性剂。

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表 1.显示了与 DynaMarker® Small RNA II 相比的表观分子量,以及适用于 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物电泳的丙烯酰胺浓度。 (* 75 碱基 RNA 来自新合成的 RNA。75 碱基 RNA 不包含在 DynaMarker® Small RNA II 中。)

存储缓冲区 

2 mM Tris-HCl (pH8.0)、8mM EDTA、78% 甲酰胺

质量控制 

将 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物在 37 °C 下孵育 24 小时后,在 15% 聚丙烯酰胺 - 7.5 M 尿素凝胶电泳中未观察到标记物明显降解。 

建议上样量 5 - 10 µl

电泳条件

确保在 10 - 15% 丙烯酰胺-尿素/1 × TBE 凝胶和 1 × TBE 作为运行缓冲液上使用此标记物。在其他条件下,条带无法正确分离。

笔记

为了准确地电泳测定分子量,
应使用 DynaMarker® Small RNA II(代码# DM192)或 DynaMarker® Small RNA II Easy Load(代码# DM197)。

灵敏度

该标记物适用于化学发光(例如CDP-star ®  * 1)免疫分析。灵敏度取决于高速即时胶片(例如FP-3000B* 2  )、X光胶片或成像仪器的曝光时间长度。下图显示了一个示例。

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图 2. DynaMarker DIG 标记的小 RNA 和 hsa-miR-21 蓝色标记的检测。将 5 μl DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记和 5 μg MCF-7 总 RNA 印迹到尼龙膜上,并将 hsa-miR-21 与 DIG 标记的 DNA 探针 (2.5 nM) 杂交。使用抗 DIG-AP 抗体和 CDP-star® 检测该标记物和 has-miR-21。

*1:CDP-star® 是 Tropix, Inc. 的商标。
*2:FP-3000B 是 Fujifilm Corp. 的产品。

推荐用法 

DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物适用于监测变性丙烯酰胺凝胶电泳和膜上的印迹。一个例子如下所示:

  • DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物的电泳和印迹

1) 15%聚丙烯酰胺-7.5M尿素凝胶的制备

40 % 丙烯酰胺:双溶液 7.5 ml
尿素 9.0 g
10 × TBE 2.0 ml                                 
H2O 至 20 ml

尿素全溶解后,加入 20 μl TEMED 和 100 μl 10% 过硫酸铵。快速混合,然后将凝胶倒入立式凝胶装置的模具中。

2)上样和电泳。
使用前将 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物全解冻。将变性的 RNA 样品和 5 μl DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物装入孔中,并使用 1 × TBE 电泳缓冲液在 200 V 下运行凝胶。 3

)转移 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物和 RNA从凝胶到膜(图 3)。

3-1)切一块比凝胶稍大的带正电的尼龙膜。将膜和四张适当尺寸的吸墨纸浸泡在 1 × TBE 缓冲液中。
3-2)将两张吸墨纸放在转移池的阳极平台上。
3-3)将膜放在吸墨纸上。
3-4)将凝胶从玻璃板转移到膜的顶部并压出任何气泡。 (*确保膜和凝胶之间没有气泡。)
3-5)将另外两张吸墨纸放在凝胶上,然后设置阴极组件。
3-6)以 2 mA/cm2 传输 30 - 60 分钟。
3-7)确保标记物成功转移到膜上后,除去纸
和凝胶。用 2 × SSC 冲洗膜。
3-8)用UV交联剂将RNA固定在膜上。
3-9)进行Northern杂交(图4)。

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图 3.
左: (1) 5 µl DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物、(2) 5 µg 人乳腺总 RNA 和 (3) 5 µg 乳腺腺癌 (MCF-7) 总 RNA 的电泳图谱12.5 % 聚丙烯酰胺 - 7.5 M 尿素凝胶/1× TBE 缓冲液作为运行缓冲液。
右: 将 (1) - (3) 印迹到尼龙膜上。

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图 4. hsa-miR-21 和 hsa-miR-16 的检测 DIG 标记的 DNA 探针与印有乳腺总 RNA 和 MCF-7 总 RNA 的尼龙膜杂交,并用抗 DIG-AP 抗体检测探针和化学发光AP底物。


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