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mediomics:Bridge-It PDE检测试剂盒

简要描述:mediomics:Bridge-It PDE检测试剂盒
96 孔板, Bridge-It 检测, cAMP , cAMP-PDE ,细胞间信号传导,细胞内信号传导,蛋白质-蛋白质相互作用.
(Bridge-It PDE、cAMP-PDE、PDE 96 孔板、PDE 检测试剂盒、PDE Mediomics、磷酸二酯酶)

  • 产品型号:PD1016
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2023-12-20
  • 访  问  量:402

详细介绍

品牌其他品牌供货周期一个月以上
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合

mediomics:Bridge-It PDE检测试剂盒:Bridge-It® cAMP-磷酸二酯酶 (PDE) 检测试剂盒,96 孔格式 

Bridge-It® cAMP 磷酸二酯酶 (PDE) 测定是一种基于荧光的高通量筛选 (HTS) 方法,用于测量纯化来源的环核苷酸磷酸二酯酶活性并确定其抑制剂的 IC 50。该测定基于 Bridge-It® cAMP 多合一荧光测定(Mediomics,目录号 122938)的形式。

应用:

  • PDE相关药物发现项目

  • 心、肺(即COPD)、血小板功能和炎症机制的研究

  • 焦虑症或神经退行性疾病的研究

 

特征:

  • 简单: 将测试样品或标准品与测定溶液混合并在 ~25°C 下孵育

  • 快速: 孵育 30 分钟后读取荧光信号

  • 灵活: 检测方法适用于低通量和高通量筛选形式

cAMP、PDE 和 Bridge-It 荧光测定的背景信息

3',5'-环单磷酸腺苷 (cAMP)

3',5'-环单磷酸腺苷 (cAMP) 是重要的第二信使,参与多种生物过程的调节。 cAMP 的测量在新药发现中尤其重要,因为 cAMP 水平与新药发现的主要靶标之一——G 蛋白偶联受体 (GPCR) 的活性密切相关。用于测定 cAMP 浓度的 Mediomics 荧光 cAMP 测定方法基于上述测定平台设计。 CAP 是一种细菌 DNA 结合蛋白,其 DNA 结合活性取决于 cAMP 的存在,被用作测量 cAMP 水平的高度特异性生物传感器。当 PDE 将 cAMP 水解为 AMP 时,cAMP 浓度降低,从而导致 CAP-DNA 复合物形成减少,并与探针形成更多游离“半位点"双链体(未猝灭)。荧光信号的增加与 PDE 活性成正比。

 

Bridge-It® PDE 检测 – cAMP 标准曲线

以下 cAMP 标准曲线代表使用 Bridge-It® PDE 测定法制备的曲线。它显示了在 384 孔板中的缓冲液 B 中制备的标准曲线,并在添加 2X 检测溶液 30 分钟、1 小时和 2 小时后读取荧光信号。

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Bridge-It® PDE 检测 – PDE 活性检测

以下 PDE 活性测定是使用 Bridge-It® PDE 测定制备的代表性测定。相对活性是在含有指示量的牛脑 PDE 的样品中测量的(Sigma,St. Louis,MO,目录号 P9529)。将反应在室温下温育30分钟并通过添加0.5ul终止溶液来终止。添加 2X 测定溶液,并在室温下孵育 40 分钟后读取信号。

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Bridge-It® PDE 测定 – IC 50测定

以下测定是使用 Bridge-It® PDE 测定制备的代表性测定。使用来自牛脑的 0.8 mU PDE(Sigma,St. Louis,MO,Cat# P9529)和一定量的 IBMX(Sigma,St. Louis,MO)测量样品的相对活性。

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注意:RA(相对活性)的定义位于协议第 8 页。 PDE 测定在标准 384 孔板中进行,最终 10 ul 反应液含有 1 x PDE 反应缓冲液(25 mM Tris,pH 7.4,100 mM NaCl,BSA 0.1 mg/ml,CaCl2 0.03 mM,钙调蛋白(Sigma, St. Louis, MO, Cat# P1431) 10 U/ml),含有来自牛脑的 0.8 mU PDE (Sigma, St. Louis, MO, Cat# P9529) 和一定量的 IBMX (Sigma, St. Louis, MO) )。将酶和 IBMX 混合并在室温下预温育 5 分钟。添加6 pmole cAMP,并将反应在室温下温育30分钟,并通过添加0.5ul终止溶液来终止。添加 2X 测定溶液,并在室温下孵育 40 分钟后读取信号。

 

研究用途: 仅供研究使用,不可用于诊断程序。

mediomics:Bridge-It PDE检测试剂盒

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