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乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

简要描述:乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AchE属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。

测定原理:

AchE催化Ach水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成5-巯基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm处有吸收峰,通过测定412 nm吸光度增加速率,计算AchE活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1支,4℃保存。临用前加入1.3 mL试剂二,充分震荡溶解。

试剂四:粉剂×1支,4℃保存。临用前加入1.3 mL试剂二,充分震荡溶解。

粗酶液提取:

组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清液待测。

细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血清等液体:直接测定。

测定操作:

  1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。

3. 取微量石英比色皿/96孔板,依次加入20μL上清液、160 μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀,于412nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2。△A测定管=A2-A1。

AchE活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

组织AchE活性

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(Cpr ×V样)÷T

= 245×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(W ×V样÷V样总)÷T

= 245×△A÷W

细菌、细胞AchE活性

活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

= 245×△A÷细胞数量

血清AchE活性

活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷V样÷T

=245×△A

ε:TNB摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;V样总:提取液体积,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);V样:加入上清液体积(mL),0.02 mL;W :样品质量;T:反应时间(min),3 min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

  1. 组织AchE活性

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(Cpr ×V样)÷T

= 490×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(W ×V样÷V样总)÷T

= 490×△A÷W

  1. 细菌、细胞AchE活性

活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

= 490×△A÷细胞数量

  1. 血清AchE活性

活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷V样÷T

=490×△A

ε:TNB摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;V样总:提取液体积,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);V样:加入上清液体积(mL),0.02 mL;W :样品质量;T:反应时间(min),3 min。



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