您好!欢迎访问上海牧荣生物科技有限公司网站!
咨询热线

17621170138

当前位置:首页 > 产品中心 > 实验试剂 > 试剂盒 > 乙酰辅酶A测试盒

乙酰辅酶A测试盒

简要描述:乙酰辅酶A测试盒 乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)含量测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
  • 访  问  量:66

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

乙酰辅酶A测试盒

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化,经过这条通路氧化生成二氧化碳和水,释放能量用于ATP合成。此外,乙酰辅酶A是合成脂肪酸,酮体,胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。

测定原理

苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应,乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1支,-20℃保存。临用前加入250μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂三:液体10uL×1支,4℃保存。临用前加入250μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加入22.5mL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂五:液体30mL×1瓶,4℃保存。

工作液的配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×0.23 m L),将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合,或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀(可以测定96样);加样前置37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴锅中预热30 min;现配现用;

乙酰辅酶A的提取

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min,用蒸馏水于340nm处调零。

  2. 将工作液置37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴锅中预热10 min。

2、取25μL样本和230μL工作液至微量石英比色皿或者96孔板,混匀,立即记录340nm处20s的吸光值A1和80s时的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

乙酰辅酶A含量计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

标准条件下测定的回归方程为y = 1640x + 0.012;x为吸光值,y为标准品浓度(nmol/mL)。

注意:本试剂盒*低检测限为1.6nmol/mL。

(1)按照蛋白浓度计算

乙酰辅酶A含量(nmol/mg prot)=[(1640×ΔA+0.012) ×V1]÷(V1×Cpr)=(1640×ΔA+0.012) ÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2)按照样本质量计算

乙酰辅酶A含量(nmol/g 鲜重)=[(1640×ΔA+0.012) ×V1]÷(W×V1÷V2)=(1640×ΔA+0.012) ÷W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

乙酰辅酶A含量(nmol/104)=[(1640×ΔA+0.012)×V1]÷(500×V1÷V2)=(1640×ΔA+0.012)÷500

V1:加入反应体系中样本体积,0.025mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

b.使用96孔板测定的计算公式如下:

标准条件下测定的回归方程为y = 3280x + 0.024;x为吸光值,y为标准品浓度(nmol/mL)。

注意:本试剂盒*低检测限为1.6nmol/mL。

(1)按照蛋白浓度计算

乙酰辅酶A含量(nmol/mg prot)=[(3280×ΔA+0.024) ×V1]÷(V1×Cpr)=(3280×ΔA+0.024) ÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2)按照样本质量计算

乙酰辅酶A含量(nmol/g 鲜重)=[(3280×ΔA+0.024) ×V1]÷(W×V1÷V2)=(3280×ΔA+0.024) ÷W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

乙酰辅酶A含量(nmol/104)=[(3280×ΔA+0.024)×V1]÷(500×V1÷V2)=(3280×ΔA+0.024)÷500

V1:加入反应体系中样本体积,0.025mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。



上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

乙酰辅酶A测试盒







产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
扫一扫,关注微信
地址:上海市嘉定区安亭镇新源路155弄16号新源商务楼718室 传真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2024 上海牧荣生物科技有限公司 版权所有 All Rights Reserved.  备案号:沪ICP备2022017655号-1