您好!欢迎访问上海牧荣生物科技有限公司网站!
咨询热线

17621170138

当前位置:首页 > 产品中心 > 实验试剂 > 试剂盒 > 乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒

简要描述:乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒 乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
  • 访  问  量:46

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

ACC在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A,是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

 

测定原理

ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷,通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。

 

需自备的仪器和用品

分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

 

试剂的组成

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:10mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;

试剂四:粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水,溶解后4℃可保存一周。

试剂五:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水,溶解后4℃可保存一周。

试剂六:液体 25mL×1 瓶,室温保存。

试剂七:10μmol/mL 标准磷贮备液 10mL×1 瓶,4℃保存。

 

样本的前处理

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

 

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至660nm,蒸馏水调零。

  2. 酶促反应试剂的配制和预热:在试剂二瓶中加入2.5mL试剂一,充分溶解混匀;在试剂三瓶中加入2mL蒸馏水,充分溶解混匀;将试剂一、二、三在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。

3、定磷试剂的配制:按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷试剂

              应为浅黄色,若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。

注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

4、0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将试剂七20倍稀释,即取 0.5mL试剂七加9.5蒸馏水,充分混匀。

5、酶促反应

试剂名称(μL)

对照管

测定管

试剂一

90


试剂二


50

试剂三


40

样本

10

10

37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应30min后,90℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失),冷却后,10000g 25℃离心5min,取上清

6、定磷


标准管

空白管

对照管

测定管

0.5μmol/mL标准磷应用液

20




蒸馏水


20



上清液



20

20

定磷试剂

180

180

180

180

混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)保温30min,冷却至室温,在 660nm处,蒸馏水调零,记录各管吸光值A。标准管、空白管只要做一次即可,每个测定管需要设一个对照管。

注意:若测定管吸光值大于2,将样品用提取液稀释适当倍数后再进行测定,使吸光值小于2,可提高检测灵敏度,计算公式中乘以相应稀释倍数。

 

ACC活性计算: 

1、按组织蛋白浓度计算:

定义:每小时每毫克组织蛋白产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。

ACC (μmol/h/mg prot)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷

(V样×Cpr)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

2、按样本鲜重计算: 

定义:每小时每g组织产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。

ACC (μmol/h /g鲜重)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷

(W× V样÷V样总)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

  1. 按细菌或细胞密度计算:

定义:每小时每500万细菌或细胞产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。

ACC (U/104 cell)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷

(500× V样÷V样总)÷T=0.02×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

C标准管:标准管浓度,0.5μmol/mL;V总:酶促反应总体积,0.1mL;V样:加入样本体积,0.01mL ;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,0.5小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500万。



上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒








产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
扫一扫,关注微信
地址:上海市嘉定区安亭镇新源路155弄16号新源商务楼718室 传真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2024 上海牧荣生物科技有限公司 版权所有 All Rights Reserved.  备案号:沪ICP备2022017655号-1