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二胺氧化酶(DAO)测试盒

简要描述:二胺氧化酶(DAO)测试盒 二胺氧化酶(Diamine Oxidase,DAO)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

二胺氧化酶(DAO)测试盒

微量法100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

测定原理:

DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在460nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体120mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体0.3mL×1支,4℃保存。

试剂二:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体1.2mL×1管,4℃保存。

粗酶液提取:

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血清等液体:直接测定。

测定操作表:

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至460nm,蒸馏水调零。

2、操作表


对照管

测定管

粗酶液(μL)

50

50

提取液(μL)

128

108

试剂一(μL)

2

2

试剂二(μL)

20

20

试剂三(μL)


20

混匀,37℃水浴30min,微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定460nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。

酶活性计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位(U)。

DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 18×A460÷Cpr

(2)按样本质量计算:

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO活性(nmol/min/g 鲜重)= ×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T= 18×A460÷W

(3)按细胞数量计算:

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T= 18×A460÷细胞数量

 

(4) 按液体体积计算

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反总÷V样÷T= 18×A460

ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min

b. 用96孔板测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位(U)。

DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 36×A460÷Cpr

(2)按样本质量计算:

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO活性(nmol/min/g 鲜重)= ×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T= 36×A460÷W

(3)按细胞数量计算:

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T= 36×A460÷细胞数量

(4) 按液体体积计算

酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反总÷V样÷T= 36×A460

ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L /mmol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min

注意事项:

1、如果OD值小于0.01,适当加大提取用样本量;OD值大于0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样本量。

2、样品蛋白质含量需要另外测定。

上海牧荣生物科技有限公司

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二胺氧化酶(DAO)测试盒





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