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亚铁氧化酶(HP)测试盒

简要描述:亚铁氧化酶(HP)测试盒 亚铁氧化酶(Hephaestin,HP)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
  • 访  问  量:66

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

亚铁氧化酶(HP)测试盒


微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

Hephaestin (HP)作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶,HP属亚铁氧化酶家族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参与体内铁代谢。HP的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调节。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,在介导铁的跨膜转运中有重要作用。

测定原理

HP催化Fe2+氧化为Fe3+,Fe2+和ferrozine反应显色,在560 nm下有特征吸光值。通过测定Fe2+的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性。

自备用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体60 mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体1.5 mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体11 mL×1瓶,4℃避光保存。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):水(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

  1. 酶标仪预热30 min以上,调节波长至560 nm。

2. 在96孔板中加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定管

对照管

试剂一

50

50

试剂二

10

10

样本

10

10

蒸馏水

30

30

试剂三

混匀,40℃静置30 min

100

试剂三

100


混匀,立即测定A对照和A测定,ΔA=A对照-A测定。(每个测定管需设一个对照管)

HP活性计算:

标准曲线:y = 8.2135x - 0.0006,R2 = 0.9998;(x为标准品浓度,μmol/mL;y为吸光值ΔA)

  1. 按样本质量计算

单位定义:每g样本每分钟氧化1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。

HP(nmol/min/g 鲜重)=(△A+0.0006)÷ 8.2135×V总÷T ÷(W× V样÷V样总)× 1000

= 40.58×(△A+0.0006)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。

HP(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0006)÷ 8.2135×V总÷T ÷(Cpr×V样)

= 40.58×(△A+0.0006)÷Cpr

V总:反应体系体积,0.1 mL;V样:加入样本体积0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;1000,μmol到nmol的转换系数。





上海牧荣生物科技有限公司

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亚铁氧化酶(HP)测试盒








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