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内切β1,4葡聚糖酶(Cx)测试盒

简要描述:内切β1,4葡聚糖酶(Cx)测试盒 内切-β-1,4-葡聚糖酶(Cx)活性测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-06
  • 访  问  量:97

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

共价结合型果胶(CSP)含量测试盒

  微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

Cx(EC3.2.1.4)存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份之一,Cx主要作用于非晶态纤维素和水溶性纤维素衍生物,随机水解糖苷键,将其分解成葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖和其他寡聚体。

测定原理:

采用3,5-二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品:

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体25mL×1瓶,4℃保存;

样品测定的准备: 

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、加样表(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL)

测定管

对照管

  样本

10

10

试剂一

100


蒸馏水


100

混匀,37℃准确水浴2h

试剂二

200

200

混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,测540nm下吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

Cx活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 6.4078x - 0.0673;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、血清(浆)Cx活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷V样÷T

=14.305×(ΔA+0.0673)

3、细胞、细菌和组织中Cx活力的计算

(1)按照蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(500×V样÷V样总) ÷T

=0.0286×(ΔA+0.0673)

1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反总:反应体系总体积,0.11mL; V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,120 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 3.2039x - 0.0673;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、血清(浆)Cx活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷V样÷T

=28.61×(ΔA+0.0673)

3、细胞、细菌和组织中Cx活力的计算

(1)按照蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

Cx活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(500×V样÷V样总) ÷T

=0.057×(ΔA+0.0673)

1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反总:反应体系总体积,0.11mL; V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,120 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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内切β1,4葡聚糖酶(Cx)测试盒



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