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半胱氨酸(Cys)含量测试盒

简要描述:半胱氨酸(Cys)含量测试盒 半胱氨酸(cysteine, Cys)含量测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

半胱氨酸(Cys)含量测试盒

微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中,Cys是一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

测定原理:

Cys还原磷钨酸生成钨蓝,在600nm处有吸收峰;通过600nm吸光度,计算Cys含量。

自备仪器和用品:

低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、85%磷酸和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。用前1天,向试剂三中加2.5mL蒸馏水充分溶解,再加85%磷酸0.625mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴2h;冷却后加10mL蒸馏水,4℃可保存2周。

标准品:粉剂×1瓶,临用前加10 mL蒸馏水,充分溶解。1μmol/mL标准液,4℃避光保存。用不完的试剂4℃可保存3天。

半胱氨酸提取:

  1. 液体样品中半胱氨酸提取:取0.1mL液体样品,加试剂一0.9mL,充分混匀,8000g

4℃离心10min,取上清液,待测。

  1. 组织中半胱氨酸提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10 min,取上清液待测。

  2. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到600 nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL蒸馏水,100μL试剂二,100μL试剂三,混匀后室温静置15 min,于600nm处测定吸光值,记为A空白管。

3. 标准管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL标准液,100μL试剂二,100μL试剂三,混匀后室温静置15 min,于600nm处测定吸光值,记为A标准管。

4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL上清液,100μL试剂二,100μL试剂三,混匀后室温静置15 min,于600nm处测定吸光值,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需要做一次。

计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按液体样品的体积计算:

半胱氨酸含量(μmol/mL)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×(V样总÷V样)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

2. 按样本质量计算:

半胱氨酸含量(μmol/g 鲜重)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×(V样总÷V样)÷W=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

3. 按照蛋白浓度计算:

半胱氨酸含量(μmol /mg prot)= [C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷(V样×Cpr)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

4. 按细胞数量计算:

氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)] ×(V样总÷V样×细胞数量)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

C标准品:标准品浓度,1 μmol/mL;V标准品:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V样:反应体系中加入样品提取液体积,0.02 mL;V样总:样品提取液,1mL;W:样品质量,g。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1. 按液体样品的体积计算:

半胱氨酸含量(μmol/mL)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×(V样总÷V样)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

2. 按质量计算:

半胱氨酸含量(μmol/g 鲜重)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×(V样总÷V样)÷W=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

3. 按照蛋白浓度计算:

半胱氨酸含量(μmol /mg prot)= [C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷(V样×Cpr)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

4. 按细胞数量计算:

氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)] ×(V样总÷V样×细胞数量)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

C标准品:标准品浓度,1 μmol/mL;V标准品:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V样:反应体系中加入样品提取液体积,0.02 mL;V样总:样品提取液,1mL;W:样品质量,g。

注意事项:

*低检出限为100μmol/L。


上海牧荣生物科技有限公司

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半胱氨酸(Cys)含量测试盒


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