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单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

简要描述:单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

 微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

MDHAR催化MDHA还原生成AsA,在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。

测定原理:

MDHAR 催化 NADH 还原MDHA 生成 AsA和NAD+,NADH在340 nm有特征吸收峰,但是NAD+没有。通过测定340 nm光吸收下降速率,来计算出MDHAR活性。

实验中所需仪器及设备:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和双蒸水

试剂组成和配置:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,室温保存。

试剂三:粉剂×1瓶(棕色),4℃保存。临用前加入3 mL蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解。

试剂五:液体15μL×1瓶,4℃保存。临用前加3 mL试剂二充分溶解。

粗酶液提取:

组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g ,4℃离心20min,取上清液置冰上混匀待测。

3.  血清等液体:直接测定。

MDHAR测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。

3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL试剂三、20μL试剂四、20μL试剂五和120μL试剂二,最后加入20μL上清液,迅速混匀后于340nm比色,记录30s和150s的吸光值30s和150s的吸光值A1和A2,△A=A1-A2。

MDHAR活性计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T

= 804×△A ÷Cpr

(2). 按样本质量计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol NADH 为1U。

MDHAR (nmol/min /g 鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109]÷(W×V样÷V样总)÷T

= 804×△A ÷W

(3)按细胞数量计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

= 804×△A ÷ 细胞数量

(4)按液体体积计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每毫升液体每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

MDHAR (nmol/min /mL) = △A÷ε÷d×V反总×109÷V样)÷T

= 804×△A

ε:NADH摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4L;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司蛋白质含量BCA试剂盒;W :样品质量;T:反应时间,2min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下:

(1). 按蛋白浓度计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T

= 1608×△A ÷Cpr

(2). 按样本质量计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol NADH 为1U。

MDHAR (nmol/min /g 鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109]÷(W×V样÷V样总)÷T

= 1608×△A ÷W

(3)按细胞数量计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

= 1608×△A ÷ 细胞数量

(4)按液体体积计算

MDHAR活性单位定义:25℃中每毫升液体每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。

MDHAR (nmol/min /mL) = △A÷ε÷d×V反总×109÷V样)÷T

=1608×△A

ε:NADH摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V反总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4L;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司蛋白质含量BCA试剂盒;W :样品质量;T:反应时间,2min。

注意事项:

临用前配制的试剂未使用完的4℃保存,3天内使用完。


上海牧荣生物科技有限公司

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单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒






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