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单胺氧化酶(MAO)测试盒

简要描述:单胺氧化酶(MAO)测试盒 单胺氧化酶(Monoamine Oxidase,MAO)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

单胺氧化酶(MAO)测试盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官,特别是分泌腺、脑、肝脏,在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢,含量较低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纤维化的程度。此外,MAO活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱,从而引发多种病症。

测定原理:

MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛,进一步氧化成酸;底物在360nm处有特征吸收峰,测定360nm光吸收下降的速率,计算MAO活性。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体2mL×1管,4℃避光保存。

粗酶液提取:

  1. 称取约0.1g样品,加1 mL预冷的提取液一充分冰浴匀浆,1000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定)。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1.0 mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1.0 mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定),取上清置于冰上待测。

  3. 血清:直接测定。

测定操作表:

  1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至360nm。

  2. 操作表


对照管

测定管

酶液(µL)


20

试剂一(µL)

180

160

试剂二(µL)

20

20

混匀,于微量石英比色皿/96孔板,对照管调零,测定360nm处吸光值A1,然后37℃水浴60min,对照管调零,测定360nm处吸光值A2。ΔA=A1-A2

注意:空白管只需测定一次。

MAO活性计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、按蛋白含量计算

酶活定义:37℃,pH7.6时,每毫克蛋白质1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min / mg prot)= ×V反总÷(V样× Cpr)÷T= 114×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算:

酶活定义:37℃,pH7.6时,每克样品1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min / g 鲜重)=×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T = 114×ΔA÷ W

3、按照细胞数量计算

酶活定义:37℃,pH7.6时,每104个细胞1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min / 104 cell)= ×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T

= 114×ΔA÷细胞数量

4、按照液体体积计算

酶活定义:37℃,pH7.6时,每升血清1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min /L)=×V反总÷V样=114×ΔA

ε:底物摩尔消光系数,1460L /mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;T:反应时间,60min,W:样本质量,g

a.用96孔板测定的计算公式如下

1、按蛋白含量计算

酶活定义:37℃,pH7.6时,每毫克蛋白质1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min / mg prot)= ×V反总÷(V样× Cpr)÷T= 228×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算:

酶活定义:37℃,pH7.6时,每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min / g 鲜重)=×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T = 228×ΔA÷ W

3、按照细胞数量计算

酶活定义:37℃,pH7.6时,每104个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min / 104 cell)= ×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T

= 228×ΔA÷细胞数量

  1. 按照液体体积计算

酶活定义:37℃,pH7.6时,每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。

DAO活性(nmol/min /L)=×V反总÷V样=228000×ΔA

ε:底物摩尔消光系数,1460L /mol /cm; d:96孔板光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;T:反应时间,60min,W:样本质量,g

注意事项:

1、吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

2、样品蛋白质含量需要另外测定。


上海牧荣生物科技有限公司

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单胺氧化酶(MAO)测试盒





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