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吲哚乙酸氧化酶测试盒

简要描述:吲哚乙酸氧化酶测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

吲哚乙酸氧化酶测试盒

微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

吲哚乙酸(IAA)在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小,对调节体内吲哚乙酸的水平,起着重要的作用,而影响植物的生长。

测定原理:
在无机酸存在情况下,吲哚乙酸能与FeCl3作用,生成红色螯合物,该物质在530nm处有最大吸收峰,酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、1.5mL离心管、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂五:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂六:液体50mL×1瓶,4℃保存。临用前吸取1mL试剂五加入试剂六中混匀,待用,避光保存

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 血清等液体:直接测定。

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到530 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二、试剂三、试剂四置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温20min。

3. 取1.5mL EP管若干,按操作依次加入试剂,操作表如下:


标准管

测定管

试剂二(μL)

20

20

试剂三(μL)

20

20

试剂四(μL)

40

40

样本上清液(μL)

0

20

试剂一(μL)

120

100

充分混匀后置于30°恒温水浴中,保温反应30min。

实际六(μL)

400

400

充分混匀,置于30℃黑暗水浴保温显色30min。取200μL显色后呈红色的反应液于微量玻璃比色皿/96孔板中,用分光光度计或酶标仪中测定波长530nm处OD值,标准管记为A1,测定管记为A2

注意:标准管只需做一次

IAA氧化酶活性计算公式:

  1. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

IAA标准曲线公式:y = 1.334x + 0.025  R2 = 0.998 (x为IAA浓度,mmol /L;y为吸光值)

  1. 按蛋白浓度计算

酶活定义:从开始时加入的IAA量减去酶作用后残留的IAA含量,即得被酶所催化的IAA含量。以每mg酶蛋白在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

 U(μmol/h/mg prot)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样×Cpr)÷T

=1.5×(A1-A2)÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算

酶活定义:以每g样本在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U(μmol/h/g 鲜重)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总×W) ÷T

=1.5×(A1-A2)÷W

  1. 按细胞数量计算

酶活定义:以每1万个细胞在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

 

U(μmol/h/104 cell)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总×W) ÷T

=1.5×(A1-A2)÷细胞数量

  1. 按液体体积计算

酶活定义:以每mL酶液在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U(μmol/h/mL)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总) ÷T

=1.5×(A1-A2)

V样总:上清液总体积,1mL;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g,T:反应时间,0.5h。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

IAA标准曲线公式:y = 0.667x + 0.025  R2 = 0.998 (x为IAA浓度,mmol /L;y为吸光值)

(1)按蛋白浓度计算

酶活定义:从开始时加入的IAA量减去酶作用后残留的IAA含量,即得被酶所催化的IAA含量。以每mg酶蛋白在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

 U(μmol/h/mg prot)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V样÷(V样×Cpr)÷T

=3×(A1-A2)÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

酶活定义:以每g样本在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U(μmol/h/g 鲜重)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V样÷(V样÷V样总×W) ÷T

=3×(A1-A2)÷W

(3)按细胞数量计算

酶活定义:以每1万个细胞在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

 

U(μmol/h/104 cell)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V样÷(V样÷V样总×W) ÷T

=3×(A1-A2)÷细胞数量

(4)按液体体积计算

酶活定义:以每mL酶液在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U(μmol/h/mL)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V样÷(V样÷V样总) ÷T

=3×(A1-A2)

V样总:上清液总体积,1mL;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g,T:反应时间,0.5h。

注意事项:

  1. *低检出限为0.01μmol/mL。



上海牧荣生物科技有限公司

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吲哚乙酸氧化酶测试盒




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