您好!欢迎访问上海牧荣生物科技有限公司网站!
咨询热线

17621170138

当前位置:首页 > 产品中心 > 实验试剂 > 试剂盒 > 吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒

吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒

简要描述:吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
  • 访  问  量:40

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒

 微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                           

脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。

测定原理:

吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成P5C过程中分解ATP生成ADP和无机磷,通过钼酸铵比色法测定单位时间内产生无机磷的量可确定P5CS活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体60 mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体12 mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体12 mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存,用时加入25 mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周;

试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存,用时加入25 mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周;

试剂六:液体25mL×1瓶,室温保存;

试剂七:10mmol/L标准磷贮备液10mL×1瓶,4℃保存。

0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将试剂七 20倍稀释,即取 0.1mL试剂七加1.9mL蒸馏水充分混匀。

定磷剂的配制:按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。

注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

样品酶液的制备:

1、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至660nm。

2、酶促反应(在EP管中加入下列试剂)


对照管

测定管

试剂二(μL)


100

样本(μL)


100

混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)准确水浴10min

试剂三(μL)

100

100

试剂二(μL)

100


样本(μL)

100


混匀,8000g,25℃离心10min,取上清液

3、定磷(在EP管或96孔板中加入下列试剂)


空白管

标准管

对照管

测定管

0.5μmol/ml标准磷应用液(μL)


20



上清液(μL)



20

20

蒸馏水(μL)

20




定磷试剂(μL)

200

200

200

200

混匀,室温放置30min,在 660nm处,记录各管吸光值。

注意:

1、由于每一个样都必须做对照,本试剂盒100管保证测 48份P5CS活性。

2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。

3、空白管和标准管只要做一管。每个测定管设一个对照管。

计算

1、血清(浆)P5CS活力的计算:

单位定义:每小时每毫升血清(浆)中P5CS 消耗ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

P5CS活力(μmol/h/mL)=C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷V样÷T=9 ×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

2、组织中P5CS活力的计算:

(1)按蛋白浓度计算:

单位定义:每小时每毫克组织蛋白中P5CS消耗ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

P5CS活力(μmol/h /mg prot)=C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(Cpr×V样)÷T =9 ×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位定义:每小时每克组织中P5CS消耗ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。P5CS活力(μmol/h /g 鲜重)=C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(W× V样÷V样总)÷T=9 ×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准管:标准管浓度,0.5μmol/mL;V总:酶促反应总体积,0.3mL;V样:加入样本体积,0.1mL ;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1/6小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。


上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒



产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
扫一扫,关注微信
地址:上海市嘉定区安亭镇新源路155弄16号新源商务楼718室 传真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2024 上海牧荣生物科技有限公司 版权所有 All Rights Reserved.  备案号:沪ICP备2022017655号-1