详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
土壤酸性蛋白酶(SACPT)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理:
酸性条件下,S-ACPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。
所需仪器及设备:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水
试剂组成和配置:
液体一:1mL×1支,4℃保存。
液体二:0.5mL×1支,4℃保存。
试剂一的配制:临用前按液体一:液体二:蒸馏水=140(μL):20(μL):21(mL)的比例配制,现配现用,如出现白色絮状沉淀则不能用。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入6ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入2mL试剂七,沸水浴加热溶解,然后加入8ml试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂4℃保存;
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入30ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂五:液体8mL×1瓶,4℃保存;
试剂六:液体1.5mL×1支,0.05mg/ml标准酪氨酸溶液,4℃保存;
试剂七:液体5mL×1支,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定操作:
试剂一的配制:见试剂的组成和配制。
2、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。
3、样本测定:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 |
试剂一(μL) | 150 | |
试剂三(μL) | 150 |
混匀,40℃水浴30min,振荡5-6次,使土样与反应液充分接触
试剂二(μL) | 50 | 50 |
混匀,8000g25℃离心10min,取上清液,在EP管或96孔板中加入下列试剂
测定管 | 对照管 | 标准管 | |
上清液(μL) | 60 | 60 | |
试剂六(μL) | 60 | ||
试剂四(μL) | 280 | 280 | 280 |
试剂五(μL) | 60 | 60 | 60 |
混匀,40℃水浴20min,8000g 25℃离心10min,取上清液200μL,680nm下读取各管吸光值A
注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ACPT活性计算:
单位定义:每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个 S-ACPT活力单位。
S-ACPT(mg/d/g土样)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=24×(A测定管-A对照管)÷A标准管
C标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V反总:反应体系总体积,0.2mL;T:反应时间,30min=1/48d; W:样本质量,0.02g。
上海牧荣生物科技有限公司
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土壤酸性蛋白酶(SACPT)测试盒
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