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木质素过氧化物酶(LiP)测试盒

简要描述:木质素过氧化物酶(LiP)测试盒 木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

木质素过氧化物酶(LiP)测试盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

测定原理

木质素过氧化物酶催化天青脱甲基,在651nm处测定吸光值减少。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、低温离心机、酶标仪、96孔板、可调式移液器、冰。

试剂组成和配制    

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入115mL蒸馏水,充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存一个月。

试剂二:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体5mL×1支,4℃保存。

酶液提取

  1. 组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 培养液或其它液体:直接检测。                         

测定操作

1、酶标仪预热30min以上,调节波长至651nm。

2、临用前按每个样本试剂一:试剂二:试剂三=80:40:40(μL)的比例配制工作液,现配现用。

3、在96孔板中依次加入如下试剂


测定管

样品(μL)

40

工作液(μL)

160

充分混匀,立即测定651nm处10s和130s吸光值,记为A1和A2,△A=A1- A2

 

酶活计算公式

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A651变化0.01为一个酶活力单位。

LiP活性(U/mg prot)= ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每g组织在每mL反应体系中每分钟A651变化0.01为一个酶活力单位。

LiP活性(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =250×ΔA÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A651变化0.01为一个酶活力单位。

LiP活性(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T=0.5×ΔA

4.按照液体体积计算

酶活性定义每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A651变化0.01为一个酶活力单位。

LiP活性(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =250×ΔA

V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min


上海牧荣生物科技有限公司

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木质素过氧化物酶(LiP)测试盒




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