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果糖1,6二磷酸醛缩酶(FBA)测试盒

简要描述:果糖1,6二磷酸醛缩酶(FBA)测试盒 果糖1,6-二磷酸醛缩酶(Fructose 1,6 bisphosphate aldolase,FDA)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

果糖1,6二磷酸醛缩酶(FBA)测试盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植物叶绿体中果糖1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反应,在各种逆境胁迫下表现不同的响应。

测定原理

果糖1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮,在磷酸丙糖异构酶和α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化NADH和磷酸二羟丙酮生成NAD和α-磷酸甘油,340nm处吸光值的变化可反映果糖1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、震荡仪、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制   

提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂五:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。

酶液提取

①总FDA提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。

②胞浆和叶绿体FDA酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆FDA酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中FDA酶活性。

建议测定总FDA酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FDA,则按照步骤②提取粗酶液。

测定操作

  1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

  2. 取微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL试剂一,20μL试剂二,20μL试剂三,20μL试剂四,20μL试剂五,20μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A1-A2

 

计算公式

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

(3)按照细胞数量计算

酶活单位定义:每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T

                = 321.54×ΔA÷细胞数量

(4)按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T=321.54×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L/mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

  1. 用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T= 643.08×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T= 643.08×ΔA÷W

(3)按照细胞数量计算

酶活单位定义:每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T

                = 643.08×ΔA÷细胞数量

(4)按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T= 643.08×ΔAV反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

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