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果糖1,6二磷酸酶(FBP)测试盒

简要描述:果糖1,6二磷酸酯酶测试盒 果糖1,6二磷酸酶(FBP)测试盒 果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase,FBP)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
  • 访  问  量:50

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

果糖1,6二磷酸酯酶测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

果糖-1,6二磷酸酶又称果糖1,6二磷酸酯酶,催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷,在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。

测定原理

FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷,在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算FBP活性。

需自备的仪器和用品

分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入20mL试剂四充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂二:液体7.2μL×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂四:液体25mL×1瓶, 4℃保存;

样本的前处理

①总FBP提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。

②胞浆和叶绿体FBP酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中FBP酶活性。

建议测定总FBP酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP,则按照步骤②提取粗酶液。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

  2. 将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。

  3. 加样表:

试剂名称(μL)

测定管

样本

20

试剂二

10

试剂三

10

试剂一

160

将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿或96孔板中,立即混匀,加入最后一个试剂的同时开始计时,在340 nm波长下记录反应1min后吸光度A1和反应6min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。

FBP活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.5×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

b.96孔板测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

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果糖1,6二磷酸酯酶测试盒






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