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植酸酶测试盒

简要描述:植酸酶测试盒 植酸酶(phytase)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

植酸酶测试盒 

微量法100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植酸酶(phytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称,属磷酸单酯水解酶,它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理

植酸酶在一定温度和pH值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物,在700nm处有特征吸收峰,根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅,超声溶解器,回旋式振荡器。

试剂组成和配制

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

缓冲液:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1支,4℃保存,临用前加缓冲液6mL配制,现用现配;用不完的试剂4℃保存一个月。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。

显色剂:粉剂×8瓶,4℃保存,临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解,再加1.6mL试剂二混匀

样本处理

  1. 酶制剂:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:500~1000的比例(建议称取约0.001g,加入1mL提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,待测。

  2. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。

  3. 饲料样品:饲料烘干粉碎,过40目筛,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。

  4. 培养液等液体样品,混匀直接测定。

测定操作表


对照管

测定管

样本(µL)

30

30

37℃温育5min

缓冲液(µL)

120


试剂一(µL)


120

混匀,37℃温育30min

95℃,10min终止反应,冷却至室温

显色剂(µL)

150

150

混匀,37℃静置15min,10000g,室温,离心5min,取上清200µL,测定700nm处吸光值,△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

酶活性计算公式

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.2764x + 0.0082,R2 = 0.9998;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值。

  1. 按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△A-0.0082)÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×(△A-0.0082)÷Cpr2.按照样本质量计算

酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min /g 鲜重)=(△A-0.0082)÷0.2764÷W÷T =0.1206×(△A-0.0082)÷W

3. 培养液等液体样品

酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min /mL)=(△A-0.0082)÷0.2764÷T =0.1206×(△A-0.0082)

                 

Cpr:样本蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min。

b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.1382x + 0.0082,R2 = 0.9998;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△A-0.0082)÷0.1382÷Cpr÷T = 0.2412×(△A-0.0082)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min /g 鲜重)=(△A-0.0082)÷0.1382÷W÷T =0.2412×(△A-0.0082)÷W

3. 培养液等液体样品

酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/min /mL)=(△A-0.0082)÷0.1382÷T =0.2412×(△A-0.0082)

                 

Cpr:样本蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min。

注意事项

1、显色剂需要临用前根据用量配制,每一瓶是13个样本的用量,新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期,应放弃使用。

2、ΔA线性范围为0.01-1。


上海牧荣生物科技有限公司

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