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氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒

简要描述:氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。

测定原理:

利用2-VP法测GSSG含量。

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配置:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体600μL×1支,4℃保存。

试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。

试剂五: 液体15μL×1瓶,-20℃保存。临用前加入0.3mL试剂三稀释,4保存

试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入20 mL试剂三溶解,现配现用

粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)混匀待测。

3. 血清等液体:直接测定。

GSSG含量测定:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到412nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。

3.取1 mL EP管,加入100μ L上清液,5 μ L试剂二,盖紧后混匀,得混合液,置于37℃水浴30min;取21μ L混合液于96孔板,然后依次加入20 μ L试剂四、2 μ L试剂五和140 μ L试剂六,迅速混匀后,测定30 s和150 s光吸收A1和A2,计算ΔA=A2-A1。

GSSG含量计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0276x-0.0011;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值(ΔA)。

2、 按蛋白浓度计算

GSSG(nmol/mg prot)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样×Cpr)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr

3、按样本鲜重计算

GSSG(nmol /g 鲜重)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×W)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷W

4、按细胞数量计算

GSSG(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷细胞数量

5、按照液体体积计算

GSSG(nmol/mL)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷V样

=36.23×(ΔA+0.0011)

V样:反应中加入样本体积,20μL;V样总:加入提取液体积, 1mL;W:样品质量,g,Cpr:样本蛋白浓度(mg/mL)

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0138x-0.0011;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值(ΔA)。

2、 按蛋白浓度计算

GSSG(nmol/mg prot)=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样×Cpr)

=72.46×(ΔA+0.0011)÷Cpr

3、按样本鲜重计算

GSSG(nmol /g 鲜重)=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×W)

=72.46×(ΔA+0.0011)÷W

4、按细胞数量计算

GSSG(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)

=72.46×(ΔA+0.0011)÷细胞数量

5、按照液体体积计算

GSSG(nmol/mL)=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷V样

=72.46×(ΔA+0.0011)

V样:反应中加入样本体积,20μL;V样总:加入提取液体积, 1mL;W:样品质量,g,Cpr:样本蛋白浓度(mg/mL)

注意事项:

  1. 提取过程中去掉蛋白质,所以提取液不能用于测定蛋白含量。

  2. 临用前配制的试剂配好后4℃保存,2天内使用完毕。

  3. *低检出限为0.1μmol/L。

  4. 反应温度严格来说,为保证重复性,应在25℃下进行反应。

  5. 反应时间需精确控制,否则会影响反应速率计算,产生较大误差。

  6. 样品中的GSSG浓度尽可能低一些,否则反应速率太大,没法控制,所以稀释倍数要尽量大些。


上海牧荣生物科技有限公司

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氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒




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