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胃蛋白酶测试盒

简要描述:胃蛋白酶测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:42

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

胃蛋白酶测试盒

微量法 100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:                           

胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。

测定原理:

胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入10mL试剂二充分溶解。

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。

试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入15mL蒸馏水充分溶解。

试剂六:液体3.3mL×1瓶,4℃保存。

标准品:液体1.27mL×1支,0.5μmol/mL酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。

粗酶液提取:

组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。

测定步骤:

1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到580 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。

3. 标准管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μL标准品,40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580 nm测光吸收,记为A标准管。

4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μL蒸馏水,40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于 580 nm测光吸收,记为A标准空白管。

5. 对照管:取 EP管,加入100 μL蒸馏水,置于37℃水浴保温10min;加入100μL试剂四,盖紧后摇匀1min;加入20μL粗酶液,混匀后8000g 4℃离心10分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL,再加入40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580 nm测光吸收,记为A空白管。

6. 测定管:取 EP管,加入20μL粗酶液,100μL试剂三,置于37℃水浴保温10min;加入100μL试剂四,盖紧后摇匀1min;8000g 4℃离心10分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL,再加入40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于 580 nm测光吸收,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需要测定一次。

计算公式:

a.使用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

(1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot)= C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T

=27500×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鲜重)= C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T

=27500×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准品:标准品浓度,0.5 μmol/mL酪氨酸;稀释倍数:(20+100+100)÷20=11;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2mL;W:组织质量(g);V2:粗酶液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

((1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot)= C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T

=27500×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鲜重)= C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T

=27500×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准品:标准品浓度,0.5 μmol/mL酪氨酸;稀释倍数:(20+100+100)÷20=11;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2mL;W:组织质量(g);V2:粗酶液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min。

注意事项

试剂三、试剂四、试剂五临用前配制,配制好用不完的试剂4℃可保存一周。


上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

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胃蛋白酶测试盒




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