详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
脯氨酸(PRO)含量测试盒
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
测定原理:
用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm测定吸光度。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、冰乙酸25mL、甲苯50mL、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:冰乙酸25 mL×1瓶, 4℃保存。(自备)
试剂二:液体25 mL×1瓶, 4℃保存。
试剂三:甲苯50mL×1瓶,4℃保存。(自备)
样品测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),匀浆;之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),充分混匀,之后置95℃水浴振荡提取10分钟,10000g,25℃离心10分钟,取上清,冷却后待测。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
样本测定:
(1) 取0.25mL样本+0.25mL试剂一+0.25mL试剂二 于有盖EP管中,置95℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。
(2) 待冷却后,加入0.5mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取0.2mL上层溶液于微量石英比色皿或96孔板中,于520nm波长处比色,记录吸光值A。
Pro含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、典型回归方程y = 0.0521x - 0.0021 (x为脯氨酸含量,μg/mL;y为吸光值A)
2、按照血清(浆)体积计算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2)=192×(A+0.0021)
3、按照蛋白浓度计算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照样本质量计算
Pro含量(µg/g鲜重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W
5、按照细菌或细胞密度计算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)
V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、典型回归方程y = 0.02605x - 0.0021 (x为脯氨酸含量,μg/mL;y为吸光值A)
2、按照血清(浆)体积计算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V3×V1÷V2)=384×(A+0.0021)
3、按照蛋白浓度计算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V1×Cpr)=38.4×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照样本质量计算
Pro含量(µg/g鲜重)= [(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(W×V1÷V2)=38.4×(A+0.0021) ÷W
3、按照细菌或细胞密度计算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0769×(A+0.0021)
V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意:*低检测限为1μg/mL或1μg /g鲜重 或0.01μg /mg prot
上海牧荣生物科技有限公司
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