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脯氨酸(PRO)含量测试盒

简要描述:脯氨酸(PRO)含量测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:49

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

脯氨酸(PRO)含量测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。 

测定原理:

用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm测定吸光度。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、冰乙酸25mL、甲苯50mL、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:冰乙酸25 mL×1瓶, 4℃保存。(自备)

试剂二:液体25 mL×1瓶, 4℃保存。

试剂三:甲苯50mL×1瓶,4℃保存。(自备)

样品测定的准备: 

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),匀浆;之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。

2、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),充分混匀,之后置95℃水浴振荡提取10分钟,10000g,25℃离心10分钟,取上清,冷却后待测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

  2. 样本测定:

(1) 取0.25mL样本+0.25mL试剂一+0.25mL试剂二 于有盖EP管中,置95℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。

(2) 待冷却后,加入0.5mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取0.2mL上层溶液于微量石英比色皿或96孔板中,于520nm波长处比色,记录吸光值A。

Pro含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、典型回归方程y = 0.0521x - 0.0021  (x为脯氨酸含量,μg/mL;y为吸光值A)

2、按照血清(浆)体积计算

Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2)=192×(A+0.0021)

3、按照蛋白浓度计算

Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr

4、按照样本质量计算

Pro含量(µg/g鲜重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)

V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、典型回归方程y = 0.02605x - 0.0021  (x为脯氨酸含量,μg/mL;y为吸光值A)

2、按照血清(浆)体积计算

Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V3×V1÷V2)=384×(A+0.0021)

3、按照蛋白浓度计算

Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V1×Cpr)=38.4×(A+0.0021)÷Cpr

4、按照样本质量计算

Pro含量(µg/g鲜重)= [(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(W×V1÷V2)=38.4×(A+0.0021) ÷W

3、按照细菌或细胞密度计算

Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0769×(A+0.0021)

V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

注意:*低检测限为1μg/mL1μg /g鲜重 或0.01μg /mg prot


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脯氨酸(PRO)含量测试盒


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