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脂蛋白酯酶(LPL)测试盒

简要描述:脂蛋白酯酶(LPL)测试盒 脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase,LPL)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

脂蛋白酯酶(LPL)测试盒

微量法100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶,可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯,以供组织氧化供能和贮存,并在不同的组织表现出不同的生理意义。

测定原理

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制    

试剂一:液体105mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体4mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。

样品处理

  1. 组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清待测。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心10min,取上清待测。

  3. 血清:直接测定。

测定操作


对照管

测定管

样品(μL)

20

20

试剂一(μL)

80


试剂二(μL)


80

混匀,45℃水浴10min

试剂三(μL)

100

100

充分混匀,25℃静置2min,于微量石英比色皿/96孔板,测定400nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管

计算公式

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y= 0.0581x -0.0169,R2=0.9982

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/mg prot)= (△A+0.0169)÷ 0.0581×V反总÷(V样×Cpr)÷T

= 17.21×(△A+0.0169)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每克组织每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/g 鲜重)=(△A+0.0169)÷0.0581×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

= 17.21×(△A+0.0169)÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/104 cell)= (△A+0.0169)÷0.0581×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T

                                        = 17.21×(△A+0.0169)÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每毫升血清每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/mL)=(△A+0.0169)÷0.0581×V反总÷V样÷T

                                 = 17.21×(△A+0.0169)

V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;W:样本质量,g;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y= 0.029x -0.0169,R2=0.9982

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/mg prot)= (△A+0.0169)÷ 0.029×V反总÷(V样×Cpr)÷T

= 34.42×(△A+0.0169)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每克组织每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/g 鲜重)=(△A+0.0169)÷0.029×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

= 34.42×(△A+0.0169)÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/104 cell)= (△A+0.0169)÷0.029×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T

                                        =34.42×(△A+0.0169)÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义在45℃,pH7.5条件下,每毫升血清每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/mL)=(△A+0.0169)÷0.029×V反总÷V样÷T

                                 = 34.42×(△A+0.0169)

V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;W:样本质量,g;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min

注意事项

  1. 试剂三加入混匀后静置两分钟立即测定,否则影响吸光值。

  2. 吸光值过高或者测定结果不稳定,则将酶液进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。


上海牧荣生物科技有限公司

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脂蛋白酯酶(LPL)测试盒





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